Microbiologia

TESTE CONFIRMATIVO PARA COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES

Procedimento:

Os alimentos de maneira geral estão constantemente sujeitos à contaminação em diversas etapas – transporte, corte, preparo, etc. – muitas substâncias são capazes de causar diversos transtornos ao organismo. Testes microbiológicos, bem como outros testes, são aplicados para determinar a aceitabilidade de vários tipos de alimentos. Os testes microbiológicos, laboratoriais e industriais, seguem padrões para que alcancem os melhores níveis possíveis de confiabilidade.

1.As vidrarias (pipetas, tubos de ensaio e tubos de Durham) foram envoltas com papel Kraft e postas em autoclave (15min a 121°C) juntamente com os reagente que precisem ser estéreis.

2.Para se obter a água peptonada 1%, misturou-se 0,2 g de peptona para 200 mL de água destilada,agitada com bastão de vidro em erlenmeyer.No preparo do caldo E.C foram pesados 3,2958 g de pó no erlenmeyer e no preparo do caldo V.B foram pesados 3,6 g, para ambos avolumou-se 90 mL de água destilada usando uma proveta.

3.As amostras foram preparadas da seguinte maneira: a primeira,10-1, foi obtida utilizando-se 10g de queijo coalho e 90mL de água de diluição em sacos estéreis próprios para preparo de amostras sólidase então macerados manualmente para homogeneizar a amostra. Em seguida, a 10-2, foi obtida adicionando-se 1 mL da amostra 10-1 ao tubo de ensaio com o caldo verde brilhante e com identificação indicando a segunda diluição, e assim consecutivamente para as próximas diluições até 10-5. O equipamento de corte foi flambado passando no álcool 70% e exposta na chama do bico de Bunsen.

4.As amostras – suco de cupuaçu e queijo coalho - em triplicata de três diluições (10-1, 10-2 e 10-3) em tubos de ensaio com tampa contidos de tubos de Durham, foram inoculadas em caldo E.C e Caldo Verde brilhante por 48 horas em banho-maria 45-48°C e em estufa 35-37°C, respectivamente.

Resultados

Após o tempo de incubação das amostras de queijo coalho obtivemos os seguinte resultados:

Verde brilhante
	I	II	II
10¯¹	+	+	+
10¯²	+	-	+
10¯³	+	-	-
E.C.
	I	II	III
10¯¹	+	+	+
10¯²	-	-	+
10¯³	-	-	-

Os sinais positivos indicam os tubos de Durham que continham gás em seu interior, indicando presença de bactérias fermentadoras de lactose (SILVA, 2007). Devido o resultado ter sido omitido das tabelas de NMP, foi empregado o calculo segundo a fórmula de Thomas:

NMP/g =     [pic 1]

Para o teste confirmativo de coliformes totais em queijo coalho tivemos 66,6% das amostras positivas e o calculo de NMP, abaixo:

NMP/g = 94,93

Conforme a tabela de NMP para a combinação de tubos positivos 3-2-1 atribui-se NMP/mL = 150 e um intervalo de confiança (95%) entre 37 e 420.

E para o teste confirmativo de coliformes termotolerantes tivemos 44,4% de tubos positivos e para o calculo de NMP o resultado abaixo:

NMP/g = 45,71

        Conforme a tabela para a combinação de tubos positivos 3-1-0 atribui-se NMP/mL = 43 e um intervalo de confiança (95%) entre 9 e 180.

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