Caracterização de Enzimas

        

Universidade Federal da Bahia
Instituto de Ciências da Saúde
Departamento de Biofunção
Disciplina: Bioquímica aplicada à Nutrição
Prof.: Aline Miranda Mascarenhas / Zenira Villas Boas
Alunos: Pedro Gabriel de Paula Sousa / Tâmara Cerqueira

[pic 1]

Relatório

Caracterização de Enzimas

Caracterização de Enzimas

1. Introdução

Enzimas são proteínas com atividade catalítica. Elas aceleram reações termodinamicamente favorecidas. Os compostos transformáveis pela ação das enzimas recebem o nome de substrato. As enzimas são especificas em relação à reação que catalisam e exibem também um alto grau de especificidade em relação ao substrato. A velocidade de uma reação enzimática é função de diversos fatores, como: concentração de enzima, concentração de substrato, temperatura, pH, força iônica, etc.

1. Objetivo

Observar a atividade da enzima catalase em diferentes condições: pH, temperatura, variação da concentração de enzima e substrato.

1. Material e Métodos

-Água de alface (500 ml de água destilada + folhas de alface no liquidificador)

-H²O² 4%

-H²SO4 1N

-NaOH 1N

-Soluções tampão pH 4,5; 7,0; e 10,0

-Solução de cianeto de sódio (NaCN) a 1%

-Banho-maria

1. EFEITO DA TEMPERATURA

1. Preparar uma bateria com 3 tubos de ensaio, e enumerar.
2. Fazer outra bateria de 3 tubos, cada um contendo 3,0 ml de água de alface. Distribuir estes tubos da seguinte maneira: TUBO 1 no congelador (0°), TUBO 2 à temperatura ambiente (30°) e TUBO 3 à 100°.
3. TUBO N°1. Adicionar 1,0 ml de água oxigenada; 2,0 de água destilada; 6 gotas de solução de albumina e homogeneizar. Incubar a 0° por 10 minutos. Adicionar, cuidadosamente, 3,0 ml de água de alface, devendo a mesma já se encontrar na temperatura indicada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela.
4. TUBO N°2. Adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Incubar a 30° (temperatura ambiente) por 10 minutos. Adicionar, cuidadosamente, 3,0 mL de água de alface, devendo a mesma já se encontrar na temperatura indicada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela.
5. TUBO N°3. Adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Incubar a 100° por 10 minutos. Adicionar, cuidadosamente, 3,0 mL de água de alface, devendo a mesma já se encontrar na temperatura indicada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela.
6. Construir um gráfico, analisando resultados.

Tubo	Água Oxigenada (mL)	Água destilada (mL)	Solução albumina (gotas)	Temperatura (°C)	Água de alface (mL)	Resultado (mm de espuma)
1	1,0	2,0	6	0	3,0	5,7
2	1,0	2,0	6	30	3,0	4,2
3	1,0	2,0	6	100	3,0	0

[pic 2]

1. EFEITO DO Ph

1. Preparar uma bateria de 5 tubos de ensaio.
2. Distribuir os reagentes como indicado na tabela abaixo, respeitando a ordem dos mesmos ( da esquerda para a direita).
3. Construir o gráfico, analisando os resultados.

Tubo	Água destilada (mL)	Tampão (2 mL)	Ácido sulfúrico (gotas)	NaOH (gotas)	Água alface (ml)	Sol. Albumina	H²O² (mL)	Resultado (mm de espuma)
1	2,0	-	2	-	3,0	6	1,0	0
2	-	4,5	-	-	3,0	6	1,0	0,5
3	-	7,0	-	-	3,0	6	1,0	7,5
4	-	10,0	-	-	3,0	6	1,0	10
5	2,0	-	-	2	3,0	6	1,0	>10

[pic 3]

1. EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DO SUBSTRATO

a) Distribuir os reagentes como indicado na tabela abaixo, respeitando a ordem dos mesmos (da esquerda para a dreita).

b)Após a distribuição, homogeneizar os reagentes por uma única inversão, tampando os tubos. Esperar 10 minutos e anotar o resultado (em mm de espuma formada a partir da superfície do líquido). Anotar o resultado na tabela.

...