A Coloração de Gram

1. Introdução:

A coloração de Gram é um método tintorial muito utilizado dentro dos laboratórios de analises clinicas hoje em dia. Proposto por Christian Gram em 1884, este método consiste em diferenciar bactérias em dois grupos através da retenção do corante Cristal Violeta pela parede celular, onde as que tiverem uma maior retenção serão caracterizadas como Gram-positivas e as que tiverem uma baixa retenção (ou nenhuma) serão caracterizadas como Gram-negativas.

Em termos físico-quimicos, este procedimento baseia-se na reação de um reagente básico (Cristal Violeta) com os ácidos presentes na parede celular (Peptídeoglicano), dessa forma todas as bactérias presentes são coradas de roxo. Em seguida é adicionado Lugol para formar um complexo junto com o Vermelho de Metila, fazendo com que o corante fique retido no interior de algumas celulas. Em seguida o Alcool é adicionado para lavar as células que não apresentaram a fixação do corante. Por fim, é adicionado Fucsina Genciana para corar as bactérias que não apresentaram retenção do complexo, dando assim uma coloração vermelha a elas.

A Coloração de Gram baseia-se na diferenciação das bactérias através da cor, onde as bacterias Gram-Positivas irão apresentar uma coloração roxa, enquanto as Gram-negativas irão apresentar uma coloração vermelha.

1. Objetivo:

Nesta aula pratica temos como objetivo a observação e caracterização de bactérias presentes em cultura isolada de Agar Sangue através do método de Gram.

1. Materiais:

Cristal Violeta

Lugol

Alcool isopropilico

Fucsina Gensiana

Agua destilada

NaCl 0,9% estéril

Lamina de vidro

Bico de Bunsen

Suporte para coloração

Alça de Platina

1. Procedimento:

Preparar um esfregaço fino do material em estudo em salina estéril e secar ao ar.

Fixar o esfregaço passando a lamina rapidamente 3 ou 4 vezes sobre a chama do bico de Bunsen.

Colocar a lamina sobre um suporte de coloração e cobrir a superfície com solução de cristal violeta por aproximadamente 25 segundos.

Ainda com corante, adicionar agua destilada ate cobrir o esfregaço, deixar por aproximadamente 45 segundos.

Lavar o esfregaço com agua destilada.

Cobrir o esfregaço com Lugol por um minuto.

Descorar com Alcool ate não ser mais visível a cor violeta.

Lavar com agua destilada.

Cobrir o esfregaço com Fucsina Genciana por um minuto.

Lavar com agua destilada.

Secar com papel de filtro e observar no microscópio com objetiva de 100x e óleo de imersão.

1. Conclusao:

Foi observado na lamina bactérias com formas esféricas que apresentavam coloração azulada, após pesquisa foram caracterizadas como coccus Gram-positivo. Podendo ser do gênero Streptococcus spp  ou Staphylococcus spp.