A Microbiologia

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TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS DE CULTURA, ISOLAMENTO E MANUTENÇÃO DE MICRORGANISMOS EM LABORATÓRIO E ESTERILIZAÇÃO/DESINFECÇÃO DE EQUIPAMENTOS DE LABORATÓRIO

Belo Horizonte

2019

1. REFERENCIAL TEÓRICO

1. Meios de Cultura

“O estudo de bactérias e leveduras exige o prévio isolamento e identificação dos mesmos, e para tanto, são utilizados diversos meios de cultura diferentes.” (VIEIRA, 2012)

Algumas bactérias podem crescer normalmente em qualquer meio de cultura, outras necessitam de meios especiais e existem aquelas que não são capazes de crescer em nenhum meio de cultura já desenvolvido.

Ainda segundo Vieira, para o cultivo de microrganismos, usam-se meios de cultura. Esses meios podem ser definidos como um conjunto de nutrientes necessários para que haja um crescimento e multiplicação desses seres, ou seja, é um ambiente estéril que fornece os elementos nutritivos indispensáveis ao crescimento do microrganismo.

Há uma grande variedade de procedimentos e preparações utilizados de acordo com a exigência de cada microrganismo, sejam eles fungos ou bactérias. Devido as grandes variações das necessidades nutritivas dos microrganismos, os meios de cultura são bastante diferentes em sua composição.

A diferença também pode estar em seu estado físico, sendo dividido em: líquido, sólidos e semi-sólidos. De acordo com a sua composição e os objetivos a que se destinam, os meios de cultura podem ainda ser classificados em: (ARAÚJO, 2013)

•         Basal – só possui os nutrientes básicos para o crescimento dos microrganismos em geral.

•         De enriquecimento – é suplementado com nutrientes específicos para o microrganismo que se deseja pesquisar. Além disso, pode apresentar agentes inibidores de determinados microrganismos, mas não permite o seu isolamento, pois é um meio líquido.

•         Seletivo – possui agentes inibidores de determinados microrganismos.

Permite a identificação e isolamento, pois é um meio sólido.

•         Diferencial – permite a diferenciação de uma espécie e outra pelo aspecto macroscópico de seu crescimento como cor, textura, halo de hemólise, etc.

•         Sintético ou quimicamente definido – são aqueles fabricados em laboratório, cuja composição química pode ser absolutamente conhecida, até mesmo em relação aos micronutrientes.

•         Complexo – quando a composição não pode ser quimicamente conhecida, os meios de cultura são chamados complexos.

•         De transporte – são aqueles utilizados para o armazenamento e manutenção temporária de determinado material, cuja principal função é manter a viabilidade dos possíveis microrganismos presentes.

Para a contagem de bactérias em geral, vários meios de cultivos podem ser utilizados, como: ágar-nutriente, ágar-sangue, ágar-leite desnatado, ágar-chocolate, etc. Já para a contagem de leveduras, os meios mais comumente utilizados são: extrato de levedura-peptona-dextrose-ágar, extrato de malte e ágar-batata-dextrose. A maior parte dos meios de cultura está disponível comercialmente na forma desidratada e para seu uso, faz-se a dissolução em água e esterilização. (VIEIRA, 2012)[pic 1][pic 2]

Fig 1. Meio de cultura para crescimento bacteriano em placas de petri

1.  Isolamento                                                                                                                      

O estudo dos microrganismos está muitas vezes dependente da possibilidade de cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório, sob a forma de culturas puras As necessidades nutricionais específicas dos microrganismos variam de espécie para espécie, sendo possível distinguir vários grupos nutricionais de microrganismos. Com o conhecimento dos nutrientes necessários ao crescimento dos microrganismos, é possível a formulação de meios de cultura que promovam o crescimento de um determinado microrganismos no laboratório

O isolamento de um determinado microrganismo em cultura pura a partir de uma população mista (por exemplo, presente numa amostra de solo, na água de um rio, num esgoto, num alimento ou tecido contaminado, etc.) envolve, em geral, o uso de meios de cultura sólidos e o recurso a técnicas de isolamento de colónias, como seja pelo método de espalhamento em placa, ilustrado na animação ao lado. Este método permite obter colônias individualizadas e espacialmente separadas que, teoricamente, são originadas a partir de uma única célula, correspondendo, por isso, a uma cultura pura de um microrganismo particular. Sabe-se, contudo, que cerca de 90% a 99% do número total de microrganismos que existem no Ambiente (por exemplo, no solo, água ou ar) não são cultiváveis em meios de cultura e outras condições laboratoriais conhecidos. Este facto tem limitado a possibilidade de serem isolados, a partir do Ambiente, microrganismos com potencial interesse para aplicações biotecnológicas. Contudo, presentemente, em consequência do grande desenvolvimento das técnicas da Biologia Molecular nas últimas décadas, o microbiologista pode identificar e estudar os microrganismos com base na análise directa das suas macromoléculas (em particular do seu DNA), sem que seja necessário isolá-los em meios de cultura laboratoriais. Entre as técnicas da Biologia Molecular que permitem este progresso salienta-se a Reacção em Cadeia da Polimerase.

1.  Manutenção de Colônias

A preservação e manutenção de culturas bacterianas vem, principalmente da necessidade de se dispor do organismo ou espécime a qualquer momento, quer para fins experimentais, didáticos, industriais ou estudos comparativos. Além de evitar contaminação, mutação e perda da viabilidade. Desta forma, conhecer a melhor maneira de preservar culturas bacterianas e dispor de técnicas simples e eficientes para tanto, reveste-se de grande valia aos laboratórios de microbiologia. (SOLA, 2011)

1.  Esterilização e Desinfecção

Um produto é microbiologicamente estéril quando não contém nenhuma forma de microrganismo vivo. Para tal objetivo podem ser utilizados tanto meios físicos (como calor, radiações ionizantes e filtração), como agentes químicos, (como gás, óxido de etileno, álcool etílico a 70%, etc.).