Anticorpos Trypanosoma cruzi no sangue do paciente por hemaglutinação indireta

1. OBJETIVO

Pesquisar a presença de anticorpos do Trypanosoma cruzi, no sangue do paciente, a partir de uma hemaglutinação indireta .

2. MATERIAIS E MÉTODOS

-Antígeno HAI-V;

-Tampão HAI-V;

-Solução proteica;

-Controles (positivo e negativo);

-Soros teste;

-Pipetas;

-Micropipetas;

-Pipetador;

-Ponteiras;

-Microplaca.

Prova Qualitativa

Primeiramente preparou-se o diluente de soro HAI-V, para tanto pipetou-se 2 ml de solução proteica e 5 ml da solução tampão. Após esse procedimento, pipetou-se 10 µl de cada amostra (soros, controle pos. e controle neg.) em tubos de ensaio, então pipetou-se 400 µl do diluente em cada um dos 4 tubos, dessa forma obtendo uma solução com diluição 1/40). Pipetou-se 50 µl do controle positivo em uma cavidade da microplaca, e ao lado, a mesma quantidade do controle negativo, em seguida pipetou-se 25 µl do antígeno, previamente agitado em cada uma das duas cavidades.

Prova Quantitativa

Pipetou-se, na cavidade da frente de cada uma das amostras controle, 50 µl da diluição realizada anteriormente com os soros testes, em seguida pipetou-se 50 µl de diluente nas 5 cavidades seguintes. Transferiu-se 50 µl da primeira cavidade, com o soro na cavidade seguinte, e assim sucessivamente, logo após adicionou-se em cada diluição 25 µl de antígeno, previamente agitado. Agitou-se a microplaca, com leves batidas, durante 30 segundos, a placa foi deixada em repouso por 60 minutos e após esse período realizou-se a leitura dos resultados.

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