CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE FACULDADE DE FARMÁCIA

UNUVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO[pic 1][pic 2]

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

FACULDADE DE FARMÁCIA

TÍTULO

Nome: Laiz Nascimento de Carvalho

DRE: 111399675

Orientadora: Débora Henriques

Laboratório.....colocar o nome completo

Caenorhabditis elegans é um dos principais organismos modelo, tanto da dimensão da patogênese como também para as perspectivas do metabolismo, envelhecimento e biologia do desenvolvimento.

Caenorhabditis elegans é um nematoide de vida livre, que se estabeleceu como um organismo modelo padrão para uma grande variedade de investigações genéticas, sendo especialmente útil para estudar biologia do desenvolvimento, biologia celular e neurobiologia. Uma grande vantagem de usar C. elegans para estudar como compostos dietéticos afetam traços biológicos complexos reside na facilidade de manipulação genética de C. elegans e sua dieta bacteriana. A utilidade potencial dos nematóides como ferramentas para a pesquisa genética foi reconhecida no início por Ellsworth Dougherty (EUA) e Victor Nigon (França), mas a popularidade especial de C. elegans deriva diretamente de sua adoção como um organismo experimental por Sydney Brenner, trabalhando em Cambridge, Reino Unido, durante a década de 1960. As razões para escolher esta espécie como um assunto para estudo intensivo são descritas mais adiante neste artigo.

C. elegans é um membro do filo Nematoda, que é comumente conhecido como lombrigas. O número de espécies neste filo é desconhecido, mas acredita-se que seja muito grande: pelo menos cem mil e provavelmente vários milhões. Em termos de números individuais, os nematóides também são extraordinariamente numerosos;

C. elegans é uma lombriga hermafrodita de vida livre e auto-fertilizante (Brenner, 1974). O tempo de geração rápida (3 dias), o tamanho de cria (300-350), tamanho pequeno (1,5 mm adulto), anatomia simples (<1000 células) e facilidade de cultura de laboratório fazem do "verme" um modelo genético favorito organismo (Barr, 2003).

OBJETIVOS

Observar e avaliar a longevidade do nematóide Caenohabiditis elegans, utilizando a cepa de Escherichia coli OP50 como fonte de alimento, atribuindo o tempo de vida do nematoide aos metabólitos produzidos pela bactéria ou outras fontes externas.

MATERIAIS

• Placa com meio LB estéril;
• Alça de platina;
• L Broth;
• H2O estéril;
• Tubo Falcon com 8ml de L Broth;
• 10 Tubos Falcon com 2 ml de L Broth para as diluições;
• 3 Tubos Falcon estéreis;
• Tubo Falcon com 10ml de L Broth;
• Pipeta P1000 e ponteiras;
• Pipeta P100 e ponteiras;
• Pipeta P20 e ponteiras.

MÉTODOS

1. Realizar o método para obtenção de ovos (destruição das carcaças de C. elegans) e não repicar E. coli na placa de meio de cultura NG;
2. Fazer um repique de esgotamento de E. coli;
3. Deixar crescer overnight na estufa;
4. Escolher uma colônia de E. coli e diluir em um tubo Falcon com 8ml de meio    L broth;
5. Transferir 4ml da solução L broth + E. coli para outro tubo Falcon estéril;
6. Identificar os tubos como: Tubo fonte E.coli viva e Tubo fonte E.coli morta;
7. Congelar os tubos enquanto a autoclave entra em aquecimento;
8. Autoclavar o tubo identificado como “Tubo fonte e.coli morta” por 40 minutos;
9. Fazer a limpeza do fluxo laminar;
10. Fazer 5 diluições de E. coli morta em Tubos Falcon contendo 2ml de L broth;
11. Retirar o tubo fonte com E. coli viva do congelador, apenas quando for realizar as diluições para não haver;
12. Fazer 5 diluições de E. coli viva em Tubos Falcon contendo 2ml de L broth;
13. Voltar com o tubo fonte de E. coli VIVA para o congelador;
14. Na placa de 96 poços, seguindo a esquematização do experimento (10 repetições de cada grupo), pipetar na seguinte ordem:

• 130 microlitros de meio S basal;
• 50 microlitros de E. coli em L broth;
• 20 microlitros da suspensão de C. elegans em S basal

1. Fazer a contagem dos nematóides ao término do experimento (tempo zero);
2. Realizar a contagem dos nematoides por mais 3 dias;
3. Plotar os resultados no programa (GraphPad Prism)

*Grupos: Diluições E. coli viva, tubo fonte E. coli viva; Diluições E. coli morta, tubo fonte E. coli morta.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

C. elegans é um organismo bem estabelecido para estudar os mecanismos que determinam a longevidade e os efeitos dietéticos na fisiologia animal podendo utilizar uma variedade de bactérias como fonte de alimento sendo a mais comum a cepa E. coli OP50.