Coloração de Gram

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NOME: ISAC DOS SANTOS LIMA                                2º TMA  2015.1

AULA PRATICA DE MICROBIOLOGIA

1. INTRODUÇÃO

O relatório a seguir é uma síntese de aulas praticas realizadas nos dias 10 de Abril de 2015 e 17 de Abril de 2015, ministradas pela prfª Cristiane Tessmann ele consiste na coloração de Gram, como o próprio nome diz é uma técnica de coloração, para diferenciação de microrganismos através das cores, para assim serem observados em microscópio óptico.

2. REFERENCIAL TEÓRICO

Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microrganismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram.

Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas.  Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de Gram é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.

3. OBJETIVO (S)

• Aprender o fundamento de método de coloração.
• Permitir a observação da morfologia das bactérias.
• Aprender a preparar esfregaço de bactérias.
• Realizar a técnica de coloração de Gram.
• Identificar entre Gram-positivo e Gram-negativo.

4. METODOLOGIA

• 1º dia

Foram ministrada duas aulas práticas no laboratório de microbiologia, utilizadas para o preparo de esfregaço e a outra para a coloração.

           No primeiro momento, preparamos o esfregaço com as seguintes matérias: lâmina, álcool, vela (formando um cone de proteção), alça de platina, água destilada estéril, amostra de cultura (bactérias coletadas na aula anterior) e papel toalha.

• Realizar a desinfecção da bancada e a anti-sepsia das mãos.
• Pegar uma lâmina limpa.
• Flambar a alça de platina na vela, deixando-a esfriar próxima a chama.
• Retirar 3 “alçadas” de água destilada estéril e depositar sobre a lâmina.
• Flambar mais uma vez a alça de platina no chama da vela.
• Coletar com a alça uma amostra de bactéria do meio de cultura depositar na lâmina.
• Homogeneizar a bactéria com a água, com movimentos circulares.
• Deixar o esfregaço secar próximo a chama da vela.
• Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 3 vezes na  chama da vela (rapidamente).

        No segundo momento, utilizamos a técnica de coloração, assim podemos ver e classificar as células em Gram-positivo e Gram-negativo. Com os seguintes matérias: água, cristal violeta, Iugol, álcool-acetona e papel toalha.