A Observação da Coloração por Microscópio

Observação da coloração em microscopio

Objetivo

        No âmbito da unidade curricular de Microbiologia foi-nos proposto pelo professor João Gomes a realização de um relatório sobre coloração de cristal violeta e safranina.

        A técnica de Gram, mundialmente conhecida como coloração de Gram, é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), em 1884, o qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos.

O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. As bactérias que adquirem a coloração azul violeta são chamadas de Gram-positivas e aquelas que adquirem a coloração vermelho são chamadas de Gram-negativas.

        Safranina(também chamada de safranina ou vermelho básico) é um corante biológico usado em histologia e citologia. Safranina é usada como um corante de contraste em alguns protocolos (métodos) de coloração, colorindo todo núcleo celular de vermelho. Este é um clássico corante de contraste no método de coloração de Gram. Este também pode ser usado para a deteção de cartilagem, mucina e mastócitos.

        

Material/Reagentes

• Lâmina;
• Lamela;
• Pipeta de Pasteur;
• Óleo de imersão;
• Microscópio;
• Álcool (se necessário);
• Bico de Busem;
• Água destilada;
• Reagente de safranina;
• Amostras (U, L, G).

Procedimento

1. Coloração a fresco

Amostra identificada com L e U

Retirar uma gota do tubo corretamente identificado, com a ajuda de uma pipeta de Pasteur e colocar sobre a lâmina identificada com a letra L, de seguida num angulo de 45º sobrepor uma lamela à amostra. Por fim, observar no microscópio a amostra nas ampliações 4x, 10x e 40x, obtendo apenas os resultados pretendidos na última ampliação.

Todo este procedimento foi repetido para a amostra identificada com U.

1. Coloração simples de safranina

Amostra identificada com G

        Retirar uma gota do tubo corretamente identificado, com a ajuda de uma pipeta de Pasteur e colocar sobre a lâmina identificada com a letra G, de seguida fixar a amostra com o bico de busen durante alguns segundos e cobrir toda a amostra com o reagente de safranina. Deixar atuar durante um minuto, por último retirar o excesso com água até excluir todo o reagente de safranina.

 Concluindo assim, com a observação da amostra no microscópio nas ampliações 4x, 10x, 40x e 100x, tendo colocado uma gota de óleo de imersão na ampliação 100x., para melhor observação. De salientar, que não foi observado os resultados pretendidos na última ampliação.