Coloração de gram

INTRODUÇÃO

Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microorganismos através de cores, para serem observados em microscópio. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico, dinamarquês, Hans Cristian Joaquim Gram.

Por volta de 1884, Gram observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriam cores diferenciadas.  Assim, as que coravam em tons de roxo foram classificadas em Gram-positivas, e as que coravam em tons de vermelho ou rosa, foram classificadas em Gram-negativas. A técnica de Gram  é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

OBJETIVO

Identificação e diferenciação entre dois grupos de bactérias, Cocos Gram-positivos e Bacilos Gram-negativos, através de microscopia.

MATERIAL

• Lâmina (Já preparada anteriormente)
• Microscópio

REAGENTES

• Cristal violeta
• Lugol
• Etanol-acetona
• Fucsina

MÉTODOS

• Fixar a lâmina
• Realizar a coloração
• Deixar a lâmina secar
• Observar sob microscopia

PROCEDIMENTOS

Após fixar a lâmina, já preparada anteriormente, aplicou-se cristal violeta, por toda a extensão do esfregaço, durante 1 minuto. Foi retirado o excesso do produto e aplicado lugol, também durante 1 minuto, com leve lavagem após o tempo de reação.

Em seguida, foi feita a descoloração com etanol-acetona, posicionando a lâmina 45° e escorrendo pequena quantidade do produto, por todo o esfregaço, até obter um tom de lilás.

Aplicou-se então a fucsina durante 30 minutos, e foi escorrido o excesso do produto, logo em seguida.

A lâmina ficou em repouso até secar completamente e foi realizada a análise microscópica.

RESULTADOS

Foi observado na microscopia que as bactérias, do grupo Cocos, coraram em um tom de rosa, ou seja, Gram-negativas.

CONCLUSÃO

O resultado alcançado não correspondeu ao esperado , pois não se encaixou em nenhum dos dois grupos apresentados.

A coloração esperada para o grupo Cocos seria roxa, ou seja, Gram-positiva. No entanto, devido a falta de lavagem após o uso da fucsina, foi observado que as bactérias coraram em um tom de rosa, Gram-negativa.

REFERÊNCIA

http://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/