INSTITUTO MASTER DE ENSINO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS

DAYANE CRISTINA DE PAIVA RAMOS

JOAO JOSE SIMÃO FILHO

RIBAMAR ANTONIO DA SILVA

SAMPERSON LÚCIO PACHECO

BIOQUIMICA I

INSTITUTO MASTER DE ENSINO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS

ARAGUARI–MG/2016

DAYANE CRISTINA DE PAIVA RAMOS

JOAO JOSE SIMÃO FILHO

RIBAMAR ANTONIO DA SILVA

SAMPERSON LÚCIO PACHECO

BIOQUIMICA I

Atividade avaliativa apresentada como requisito para avaliação na disciplina de Bioquímica do curso de Farmácia do Instituto Master de Ensino Presidente Antônio Carlos.

INSTITUTO MASTER DE ENSINO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS

ARAGUARI–MG/2016

ATIVIDADE AVALIATIVA DE BIOQUÍMICA I

 Questões:

1. Descreva os métodos cromatográficos mais comuns.

2. De que maneira o ponto isoelétrico de uma proteína determina o seu comportamento eletroforético? Explique detalhadamente.

3. Você está estudando as propriedades funcionais da lipoxigenase de soja (pI das proteínas da soja, aproximadamente - pH 5,2 - ANVISA, 2001). A eletroforese em gel de poliacrilamida de uma amostra de lipoxigenase revelou a presença de uma proteína contaminante de MM 90.000, similar ao da lipoxigenase. Porém, essa proteína possui um pI três unidades mais básico do que o pI da lipoxigenase. Descreva um procedimento para eliminar a contaminação.

4. Considere uma mistura de proteínas com as propriedades apresentadas no esquema a seguir. Como estas informações podem ser usadas para a separação de proteínas? Descreva o procedimento.

Componentes da mistura	MM	pl
Proteína A	12.000	10
Proteína B	70.000	7
Proteína C	28.000	5

 

5. Sabendo que a proteína foi solubilizada em uma solução cujo pH é 7,0 e nesse pH apresenta carga positiva, qual seria a melhor maneira de separá-la de outras proteínas? Explique.

6. A purificação proteica fornece uma homogeneidade das amostras; determinou em uma purificação a massa de 60 KDa. A cromatografia em presença de 6 mol/L de ureia forneceu uma espécie de 30 KDa. Quando a cromatografia foi repetida com 6 mol/L de ureia e 10mmol/L de β-mercaptoetanol, o resultado foi de uma única espécie molecular de 15 KDa. Explique o procedimento realizado e os resultados obtidos.

Resolução:

1. Descreva os métodos cromatográficos mais comuns.

Resposta: Cromatografia método utilizado para separar determinadas classes de misturas complexas proteicas entre uma fase móvel e uma fase estacionária. Cromatografia em coluna utiliza as diferenças em cargas, tamanho, afinidade de ligação e outras propriedades das moléculas proteicas, o processo forma um material solido e poroso com propriedades químicas apropriada classificada como fase estacionária sendo colocada numa coluna sendo percolado por uma solução tamponada denominada como fase móvel, então a solução com as proteínas é adicionado no topo da coluna a fim de percolar a matriz solida em uma banda em continua expansão pela fase móvel levando com que as proteínas individuais migram de forma mais rápida ou lenta pela coluna conforme as suas propriedades. A cromatografia de troca iônica explora as diferenças no sinal das cargas elétricas liquidas das proteínas em um valor de pH, a matriz da coluna é um polímero sintético que contem grupos carregados ligados a elas fazendo com que a afinidade de cada proteína pelos grupos carregados na coluna é afetada pelo pH e pela concentração dos íons salinos livres da solução. A cromatografia de exclusão por tamanho ou também conhecida como filtração em gel faz separação das proteínas de acordo com os tamanhos, a matriz da coluna é um polímero que contem ligações cruzadas com poros de determinados tamanhos de modo que as proteínas maiores migram mais rapidamente que as menores. A cromatografia de afinidade faz separação das proteínas por suas especificidades de ligação, as proteínas retidas na coluna são aquelas que se ligam especificamente ao seu especifico ligante. A cromatografia liquida de alta eficiência faz o uso de bombas de alta pressão que aceleram a movimentação das moléculas proteicas pela coluna.

 

Bibliografia:

Lehninger: Princípios da Bioquímica

2. De que maneira o ponto isoelétrico de uma proteína determina o seu comportamento eletroforético? Explique detalhadamente.

Resposta: O comportamento eletroforético determinado pela relação com o ponto isoelétrico de determinada proteína acontece por meio de dois processos a focalização isoelétrica é utilizado para determinar o ponto isoelétrico de uma proteína, para um gradiente de pH se estabelece ao se deixar numa mistura de ácidos e bases orgânicos de baixo peso molecular sob ação de um campo elétrico por meio de um gel. Quando se mistura uma solução proteica cada proteína ira migrar ate alcançar a região do pH igual ao seu pI permitindo com que as proteínas com pontos isoelétricos diferentes são assim distribuídas diferentemente ao longo do gel, ao se combinar o processo de focalização isoelétrica com a eletroforese em SDS se pode resolver misturas complexas de proteínas, onde esse processo separa as proteínas de peso molecular idêntico que se diferem no valor de seus pI, ou proteínas com valores de pI semelhantes que apresenta pesos moleculares distintos.

Bibliografia:

Lehninger: Princípios da Bioquímica.

3. Você está estudando as propriedades funcionais da lipoxigenase de soja (pI das proteínas da soja, aproximadamente - pH 5,2 - ANVISA, 2001). A eletroforese em gel de poliacrilamida de uma amostra de lipoxigenase revelou a presença de uma proteína contaminante de MM 90.000, similar ao da lipoxigenase. Porém, essa proteína possui um pI três unidades mais básico do que o pI da lipoxigenase. Descreva um procedimento para eliminar a contaminação.

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