Microbiologia

1. Introdução

O diagnóstico das Mycobactérias patogênicas (Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium leprae), por bacterioscopia direta é feito através dos métodos de coloração de Ziehl-Neelsen o qual utiliza a característica destas bactérias de possuírem paredes celulares com alto teor de lipídeos (cerca de 60%, principalmente de Ácido micólico), que quando tratadas pelo corante Fucsina fenicada, coram-se de vermelho e persistem ao descoramento subseqüente por uma solução de Álcool-ácido forte (diferenciador). É por isto que são conhecidas por Bacilos Álcool-Ácido Resistentes (BAAR). As outras bactérias, que não possuem tais paredes celulares ricas em lipídeos, têm a sua coloração pela Fucsina descorada pela solução de Álcool-ácido e coram-se em azul pela coloração de fundo do Azul de metileno (contra-corante).

2. Objetivos

Apreender a fixação de bactérias em lâmina e a metodologia da Coloração de Ziehl-Neelsen.

3. Materiais

Amostra de escarro

Palito de madeira

Lâmina

Fucsina

Descolorante

Azul de metileno

4. Procedimentos

• Preparou-se dois esfregaços em lâminas novas, desengorduradas, limpa e seca; com amostra de escarro cedidas por colegas, utilizando um palito de madeira, deixou secar e depois as fixou no calor utilizando a chama do bico de Bunsen, (todo o procedimento do esfregaço foi feito em capela de fluxo e com a utilização de mascaras).

Coloração de Ziehl-Neelsen.

• Cobriu-se o esfregaço com fucsina e deixou agir por 5 minutos.

Aqueceu a lâmina com algodão umedecido em álcool até a emissão de vapor, sem deixar ferver.

• Lavou-se a lâmina em água corrente para eliminar o excesso de fuscina.

• Cobriu-a com o descolorante e deixou por 1 minuto.

• Lavou-a novamente para tirar o excesso.

• Cobriu-a com o azul de metileno por 2 minutos.

• Lavou-a e deixou secar para visualizar em aumento de 100X.

5. Resultado

No microscópio foram observadas muitas células epiteliais, staphylococcos entre outros.

6. Referencias

http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAkQEAB/pesquisa-baar