Método de gram

Método de coloração de Gram

- Inicia-se a técnica realizando lavagem das mãos adequada;

- Após cada aluno, ao receber um Swab, fez-se a raspagem da mucosa da boca, com objetivo de retirar células contendo bactérias;

- O material coletado foi cuidadosamente espalhado sobre uma lâmina previamente limpa e seca;

- Em seguida, a lâmina contendo o material foi colocada sobre uma caixa contendo uma lâmpada no seu interior que permitiu a secagem e fixação do material na lâmina;

- Após a fixação do material na lâmina, inicia-se a coloração de Gram: o primeiro corante utilizado é o Gram I(Cristal Violeta), e deixou-se sobre a lâmina por um minuto, lavando posteriormente com água corrente suavemente para não perder a amostra, nesse momento as bactérias absorvem Gram I e coram-se em roxas;

- Em seguida, colocou-se o corante Gram II (Lugol), deixando agir por um minuto e então lavou-se a lâmina com água corrente suavemente. As bactérias absorvem o Gram II e permanecem roxas, originando o complexo chamado iodopararrosanelina;

- Na etapa seguinte utilizou-se o Gram III (Álcool-cetona) também chamado de diferenciador, deixando agir por quinze segundos e lavando com água corrente, algumas bactérias após a coloração Gram III deixam-se descorar e liberam o complexo iodopararrosanelina, ficando incolores, outras permanecem com a cor roxa;

- A última etapa da coloração é a utilização do Gram IV(fucsina fenicada), deixando agir por trinta segundos, lavando com água posteriormente. As bactérias que estavam incolores se coram em vermelho e as que estão coradas em roxo, permanecem roxas;

- Após a coloração de Gram, a lâmina foi cuidadosamente seca com toalha de papel para retirar excesso de água. A secagem completa se deu colocando a lâmina sobre a caixa secadora contendo a lâmpada;

- Por último, a lâmina foi observada no microscópio óptico, no aumento de 100x com óleo de imersão. Verificando as formas, os arranjos e distinguindo as bactérias Gram positivas e Gram negativas através da coloração observada;