O RELATORIO GENÉTICA

RELATÓRIO GENÉTICA – MARIANA

MATERIAIS E MÉTODOS

Para a prática de amplificação dos genes mitocondriais, foi necessário preparar o mix da PCR em um Eppendorf, composto por: 16 µL de DNTP, 1 µL de cada primer, 63,2 µL de água, 0,8 µL de Taq Polimerase, 4 µL de solução de MgCl2 e 10 µL do Buffer. Essas quantidades foram equivalentes à preparação do mix para as 4 amostras de genes estudadas na prática. Após a preparação do mix, ele foi levado ao vórtex para homogeneização.

Depois, pipetou-se 24 µL do mix em 4 Eppendorf’s e adicionou-se 1,0 µL da amostra de DNA em cada um. Após a mistura ter sido novamente homogeneizada, foi levada ao termociclador e adicionou-se a programação específica para cada tipo de primer. A programação utilizada nessa prática para o rRNA 16S foi: um ciclo de desnaturação a 94°C por 5 minutos; seguidos de 30 ciclos de desnaturação do DNA a 94°C por 1 minuto, temperatura de anelamento a 50°C por 1 minuto e extensão a 72ºC por 2 minutos; encerrando o processo com uma extensão final a 72ºC por 7 minutos. Já a programação utilizada para o rRNA COI foi: um ciclo de desnaturação a 94°C por 3 minutos; seguidos de 40 ciclos de desnaturação do DNA a 94°C por 45 segundos, temperatura de anelamento a 48°C por 45 segundos e extensão a 72ºC por 1 minuto e 30 segundos; encerrando o processo com uma extensão final a 72ºC por 3 minutos.

Após o término, retirou-se os Eppendorf’s do termociclador, e seu produto pode ser armazenado a -20°C ou ser utilizado para validar a amplificação do DNA, por meio do gel de agarose.

CONCLUSÃO

Após essa prática, é possível confirmar a importância da técnica de reação em cadeia da polimerase para fabricar quantidade suficiente da região de interesse do DNA, principalmente por ter se mostrado uma técnica simples, de fácil aplicação e muito útil, já que o DNA, uma vez amplificado por PCR, pode ser enviado para sequenciamento ou visualizado por eletroforese em gel. Sendo assim, uma técnica usada em muitas áreas da biologia e medicina, incluindo pesquisa em biologia molecular e diagnósticos médicos, demonstrando a importância da prática realizada no aprendizado.