RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EXTRAÇÃO DE DNA

Extração de DNA de mucosa bucal

Para a visualização didática do DNA realizamos o seguinte experimento:

1. Higienização da boca por bochechos com água ou escovação;

2. Raspagem da mucosa bucal com cotonetes;

3. Bochecho com 5 ml de água e posterior transferência do líquido para um copo descartável;

4. Colocar o cotonete usado em um tubo de vidro e adicionar a água do bochecho (nº 3);

5. Adicionar 5 ml de solução de NaCl e homogeneizar manualmente;

6. Adicionar 1 ml de detergente, homogeneizar manualmente vagarosamente e aquecer a 60ºC por 10 minutos;

7. Resfriar por 5 minutos e retirar o cotonete pressionando o algodão contra o vidro;

8. Transferir cerca de 5 ml do volume para um tubo e adicionar 5 ml de álcool isopropílico gelado;

9. Homogeneizar cuidadosamente até visualizar o DNA.

A higienização da boca tinha como finalidade retirar possíveis resquícios de alimento, e a raspagem da mucosa bucal se faz necessária para a retirada de células epiteliais e o novo bochecho é para recuperar células que não ficaram no cotonete e assim fazer a extração do DNA destas células. A adição do sal e do detergente é para romper as membranas plasmática e nuclear, manter o pH da amostra e não afetar a estabilidade do DNA, mantendo-o em dupla hélice.Quando adiciona-se o álcool isopropílico ao experimento o DNA que é insolúvel no álcool ficará visível como uma molécula esbranquiçada e com aspecto de novelo.

Este enovelado é o DNA que estava no interior do núcleo das células epiteliais; ao adicionar o álcool no composto filtrado o DNA é precipitado pela grande diferença de solubilidade entre ele e a água; álcool e água são infinitamente miscíveis entre si. A aparência de novelo é conferida a molécula de DNA pela grande quantidade de proteínas histonas ligadas ao esqueleto proteico, elas auxiliam a manter a forma e a compactá-lo quando há necessidade.

O DNA é uma molécula composta por um açúcar (desoxirribose), grupamentos de fosfato e bases nitrogenadas; sendo que estas bases podem ser de dois tipos: purinas – adenina e guanina e pirimidinas – citosina e timina, onde adenina liga-se somente com timina e citosina somente com guanina, respectivamente por duas e três pontes de hidrogênio. O fosfato e a desoxirribose ligam-se uns aos outros por meio de ligações fosfodiéster.

Tal configuração confere a molécula a natureza hidrofóbica na porção exterior e hidrofílica na porção interior. O DNA apresenta também características como pH ácido, carga parcial negativa condicionada pelo grande número de grupamentos de fosfato, seu formato

é de duas fitas que se entrelaçam no sentido antiparalelo com informações

complementares uma a outra.

O DNA é a molécula responsável por carregar todas as informações gênicas de um ser vivo, também é conhecida como “molécula da vida”. Estas informações são agrupadas em genes, que são formados por uma trinca de nucleotídeos responsáveis pela produção de proteínas. Sabendo que os genes são partes pequenas do DNA e que esta molécula pode ser condensada, temos assim o cromossomo, mas todo o DNA de uma célula não se concentra apenas em um cromossomo, mas em vários, que no caso da espécie humana são 46, estes cromossomos são agrupados em duplas, que possuem características homólogas, nestes cromossomos os genes se