Trabalho oficial lâmina permanente

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VOLODIA SASCHO

MICROSCOPIA ÓPTICA

PREPARACAO DE LÂMINA PERMANENTE

Manaus

2016

MICROSCOPIA ÓPTICA

PREPARAÇÃO DE LÂMINA PERMANENTE

Trabalho realizado para a obtenção de nota parcial da

disciplina de Bases Biológicas ll

                                                                                  Orientadora: Niviane  Fraga

                                                           Manaus

                                                            2016

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO....................................................................... 4                        
2. EUTANASIA DOS ANIMAIS................................................5                         
3. COLETA DOS TECIDOS.......................................................6                
4.         FIXAÇÃO.................................................................................7                         
5. DESIDRATAÇÃO...................................................................8                        
6. DIAFANIZAÇÃO....................................................................9                        
7. INCLUSÃO.............................................................................10                        
8. MICROTOMIA......................................................................11                        
9. COLORAÇÃO E MONTAGEM.........................................12                        
10. CONCLUSÃO........................................................................13
11. REFERÊNCIAS....................................................................14                                                

INTRODUÇÃO

A Histologia é o estudo da estrutura do material biológico e das maneiras como os seus componentes se inter-relacionam, tanto estrutural quanto funcionalmente. O estudo da histologia se iniciou com o desenvolvimento de microscópios simples e de técnicas para preparo de material biológico, tornando-o adequado para exame. Este trabalho tem como objetivo descrever passo a passo a preparação da lamina permanente.

Onde podemos observar as estruturas microscópicas das células, dos órgãos, dos sistemas de órgãos e dos tecidos para analise em microscopia óptica. E contribuirá para a riqueza do conhecimento profissional.

Varias técnicas foram desenvolvidas para preparar os tecidos a serem estudados de modo que eles mantenham um aspecto muito próximo do seu estado natural in vivo. As etapas envolvidas são a fixação, desidratação, diafanizacao, inclusão em um meio apropriado, microtomia, a montagem em uma superfície que facilite seu manuseio e finalmente, a coloração, a qual permite a diferenciação dos vários componentes teciduais e celulares.

Histologia é usada como se fosse sinônimo de anatomia microscópica devido ao seu contexto englobar não somente a estrutura microscópica dos tecidos mas também a das células, órgãos e sistema de órgãos. A histologia nasceu com os primeiros estudiosos que se utilizaram do microscópio: Robert Hook, Malpighi, Graw, Ham, Fontana e outros, muito antes que Meyer (1819) desse esse nome à ciência que descreve os tecidos animais e vegetais.

1. EUTANÁSIA DOS ANIMAIS

Os camundongos foram retirados do biotério após a realização da eutanásia pela responsável técnica do biotério e conduzidos ao laboratório de histologia onde foram realizadas as demais etapas que envolveram a preparação de lâminas histológicas. Os animais foram eutanasiados pelo método da câmara de CO2, estabelecido pela responsável técnica do biotério da Nilton Lins. Este método de eutanásia respeitou e seguiu as diretrizes estabelecidas pelo CONCEA e foi o método de escolha por ocasionar menos estresse devido ao fato de não exigir contenção, perfuração com agulhas e inoculação de fármacos.

1. COLETA DOS TECIDOS

Após a eutanásia, foi feita a dissecação e o estudo da anatomia comparada pelo técnico do laboratório de anatomia Raimundo, juntamente com os alunos. Em seguida, foi realizada a remoção das partes dos órgãos ou tecidos (fígado, baço, tireoide, rins, nervos, bexiga, intestino, ovários, testículos, pele, pulmão e outros) com o auxilio de bisturi e pinça de maneira cautelosa inicialmente pela professora responsável, Niviane Fraga, e em seguida pelos alunos. Os tecidos ou órgãos foram cortados e subdivididos em pequenos fragmentos, orientando-se os cortes de subdivisão de maneira a estabelecer planos segundo os quais foram feitas as seções de corte.

O descarte do restante do material biológico, após a coleta dos tecidos para preparação de lâminas, será encaminhado ao biotério central do INPA que destinará apropriadamente tais resíduos de acordo com as normas sanitárias e de biossegurança vigentes.

1. FIXAÇÃO

        É a primeira etapa e tem as seguintes finalidades: evitar a autólise; impedir a atividade e proliferação de bactérias; endurecer as células para que resistam melhor às etapas seguintes da técnica citológica e aumentar a afinidade das estruturas pelos corantes, facilitando a coloração.

Utiliza-se formol (formaldeído a 10%). Esta substância tem como característica evitar o processo de autólise da célula, preservar o material biológico in vitro, impedir a destruição do tecido por procariontes, endurecer o material para melhor tratamento posterior e aumentar a capacidade de coloração do material. O tempo de fixação pode variar entre 12 e 72 horas, dependendo do material a ser processado.

4. DESIDRATAÇÃO

A desidratação do material será realizada a partir de uma sequencia crescente de álcool etílico de 70% a 100%, permanecendo uma hora em cada etapa com o objetivo de remover a água dos tecidos, nas concentrações de 1:1, de 1:2 e de 1:3.