A Coloração de Gram

Coloração de Gram

Introdução

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884, e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol álcool-acetona e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinação da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias. A técnica tem importância clínica uma vez que muitas das bactérias associadas a infecções são prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas em esfregaços de pus ou de fluidos orgânicos. Essa informação permite ao clínico monitorar a infecção até que dados de cultura estejam disponíveis. É possível a análise de vários esfregaços por lâmina, o que facilita a comparação de espécimes clínicos. As lâminas podem ser montadas de forma permanente e preservadas como documentação.

Objetivo

Confeccionar uma lâmina utilizando amostras de células epiteliais retiradas da mucosa bucal dos próprios alunos e utilizar a técnica de Gram para visualizar bactérias ao microscópio óptico.

Materiais

Lamina;

Solução salina;

Alça descartável;

Bico de Bunsen;

Swab;

Corantes: Cristal Violeta, Lugol, Álcool, Fucsina;

Papel filtro;

Microscópico;

Óleo de imersão;

Metodologia

O material biológico foi coletado esfregando firmemente a ponta de um swab na mucosa bucal de alguns alunos. Sobre a lâmina de vidro foi feito um esfregaço para depositar o material coletado. Passou-se o esfregaço na chama do bico de Bunsen a fim de fixar o material. Posteriormente cobriu-se o esfregaço seco com cristal violeta e deixamos por um minuto, após lavou-se com água corrente, secamos a lâmina e a cobrimos com solução de lugol e deixar por um minuto, repetimos o procedimento de lavar em água corrente e secar, pingou-se gotas de Álcool e deixamos por 30 segundos, lavou-se em água corrente e cobrimos a lâmina com solução de fucsina por trinta segundos, lavou-se a lâmina e a cobriu com papel filtro para a secagem. Em seguida observou-se a lamina no microscópio.

Resultados:

A lâmina foi observada primeiramente sem o óleo e podemos observar apenas células da mucosa bucal. Então foi colocada uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e mudamos para a objetiva de 100x então conseguimos observar bem a presença de bactérias gram-positivos: cocos e bacilos que obtiveram uma coloração violeta através da técnica de Gram.

Conclusão

A realização de testes básicos para identificação de bactérias, através do método de coloração de Gram, permitiu-se concluir que existem diferenças significativas na composição da parede celular de bactérias Gram positivas e Gram negativas. A técnica da coloração de Gram mostrou-se muito eficiente, pois foi possível chegar a uma conclusão sobre a forma e o arranjo das bactérias que nos foi proposto analisar.

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