A Microbiologia na Nutrição

OBJETIVO

Obter conhecimento e executar na prática duas das técnicas mais utilizadas em laboratório para observar e realizar a contagem de microorganismos em meio de cultura em placas.

PROCEDIMENTOS

O grupo considerou amostra dos grãos de Kefir de leite para análise. Primeiro, os tubos contendo solução salina estéril foram numerados de 1 a 4. Em seguida o grupo preparou a amostra a ser analisada. Por ser em grãos foi necessário pesar a quantidade a ser utilizada, e então dissolver 10 gramas em 90 ml de solução salina, sendo essa a primeira diluição (10-1).                 

Dessa primeira diluição (10-1), com o auxílio de uma pipeta estéril, foi retirado 1 ml e transferido para um tubo de ensaio contendo 90 ml de solução salina, consequentemente, obteve-se a diluição 10-2. O mesmo processo foi seguido para obter a diluição 10-3, 10-4 e 10-5.

Para a primeira técnica realizada, plaqueamento em superfície, três placas de petri foram devidamente identificadas com a respectiva diluição, nome da amostra e o meio de cultura que foi o básico (PCA, contendo água, proteínas, açúcar e ágar-ágar). E em cada placa foi colocado 0,1 ml das diluições 10-3, 10-4 e 10-5 as quais foram espalhadas, para homogeneização do inoculo, com auxílio da espátula de Drigalski, devidamente esterilizada no álcool.

As três placas de petri foram levadas à estufa, com temperatura 35°, a qual favorece o crescimento das bactérias mesófilas, por 48 horas e após o período de incubação ocorreu a análise das colônias formadas, conforme resultados apontados ao final desse relatório.

Na segunda técnica, plaqueamento por profundidade, foram colocadas 1,0 ml das diluições 10-3, 10-4 e 10-5 em placas de petri vazias e estéreis. Em seguida foi despejado, em cada placa, cerca de 20 ml do meio de cultura PCA fundido e em temperatura aproximada de 40°, a qual foi amornada para garantir que a temperatura muito elevada não matasse as células microbianas. O inoculo foi rapidamente homogeneizado através de movimentos circulares com a placa. Após endurecido o meio de cultura, as placas foram incubadas em superfície horizontal na temperatura de 35°, favorecendo o crescimento bacteriano de acordo com o resultado obtido.

RESULTADOS

Após o período de incubação, o qual favoreceu o crescimento bacteriano, as amostras foram analisadas e selecionadas para contagem total de colônias (conjunto de bactérias originadas de uma única célula). As placas consideradas para contagem devem conter de 25 a 250 colônias, para se obter resultados confiáveis.

O resultado de colônias obtido foi multiplicado pela diluição da respectiva placa, expressando o resultado em Unidades Formadoras de Colônias (UFC).

Plaqueamento em Superfície

Na placa de diluição 10-3 foram contadas 150 colônias e na placa de diluição 10-4 se obteve 10. Para obtenção do resultado de microorganismos em uma amostra utilizamos placa de diluição 10-3 a qual apresentou o valor abaixo descrito.

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