O Calculo de População

Centro Universitário Estácio do Ceará

Disciplina: Microbiologia Básica

Professora: Daniele

Equipe:

Tarmilson Rodrigues

Sara Macambira

Introdução

Práticas laboratoriais são utilizadas comumente para contagem de microrganismos presentes em uma determinada amostra. Dentre essas práticas, destacamos as técnicas de espalhamento em superfície (spread-plate) e plaqueamento em profundidade (pour-plate). A primeira técnica consiste em sucessivas diluições da amostra, e que em cada diluição é espalhada em três placas de Petri contendo meio de cultura 0,1 ml da amostra. Também conhecido como método das diluições seriadas, este método serve tanto para o isolamento quanto para contagem de microrganismos. Após o plaqueamento e incubação, por tempo e temperatura adequados, as células ou pequenos agrupamentos vão crescer isoladamente, dando origem a colônias que serão contadas na diluição apropriada e, portanto, chamadas de unidades formadoras de colônia (UFC). Evidentemente, nos tubos muito diluídos não teremos células suficientes, ao mesmo tempo em que nos tubos muito concentrados teremos excesso de células, e assim sendo não será possível se fazer uma contagem adequada nas respectivas placas. O ideal é que cada placa escolhida para contagem tenham um número de 20 a 200 colônias,isso é a quantidade considerada significativa para o método em questão. Para que os resultados obtidos sejam estatisticamente válidos, faz-se necessário trabalhar com réplicas de placas para cada diluição. Após os cálculos adequados, levando-se em conta diluição e volume, é possível determinar a quantidade de microrganismos presentes em determinado peso ou volume do material inicial. Já a segunda técnica tem como meio de cultura o ágar fundido que permite o crescimento não só ao longo da superfície como no interior do ágar.

Objetivo

Determinar o numero de micro-organismos viáveis presentes em uma colônia.

Materiais e Métodos

Materiais:

• Micro-organismo

- Staphyloccocus sp. em placa de ágar nutritivo.

• Meios de cultura e soluções

- PCA em placa;

-  água peptonada (tubos com 9 mL e 1 tubo com 1 mL).

• Equipamentos e utensílios

- Estufa bacteriológica a 35°C;

- Bico de Bunsen;

- Pipetas estéreis;

- contador de colônias eletrônico.

Método:

1º Passo: Diluição

 A diluição do micro-organismo foi feita, adicionando uma colônia do mesmo, em um tubo de ensaio contendo 1 ml de água peptonada estéril, agitando o frasco para homogeneizar essa diluição inicial.  

Em seguida, foi adicionado 1ml da homogeneização  inicial dos micro-organismos em solução de 9 ml de água peptonada estéril (diluição10-1 ).

Para completar a diluição seriada, 1 ml da diluição anterior foi adicionada em 9 ml de água peptonada estéril. Esse processo se repetiu até a diluição 10-6.

Obs.: Em todas as diluições foi utilizado uma pipeta, previamente, esterilizada.

2º Passo: Técnica

1.  Spread plate:

-  Foi feita a identificação das placas em (triplicata) de acordo com as diluições (10-6, 10-5 e 10-4);

- Foi adicionado 0,1 ml de cada diluição em sua respectiva placa contendo meio de cultura;

- Espalhou-se o inóculo sobre a superfície da placa com auxilio de uma alça de Drigalsky;

- Inverteu-se as placas para em seguida incubá-las a 35°C/48h.

Resultados e Discussões

Primeira Etapa - Diluição

Diluição seriada: Procedimento inicial da técnica de contagem de viáveis de uma colônia de micro-organismos. Custe na colheita de colônia em um meio de cultura, selecionando uma colônia especifica para realizar os procedimentos laboratoriais, e a partir disto seguir a metodologia de diluir as bases em Tubos de Ensaio, que ao longo do processo inicial até o final estabelecido gera varias amostras contaminadas em concentrações diferentes de micro-organismos.

Diluição 106: Primeira diluição. Diluição direta da colônia em 1ml de diluente  no tubo de ensaio, que gerou uma amostra de 1ml com a presença de concentração do contaminante em 106 por ml. Esta amostra é a amostra base ao qual se tem o conhecimento da taxa de células de micro-organismos na faixa de sua base, mas com uma baixa especificidade devido a grande amplitude da margem que ela se encaixa.

Diluição 105= Segunda Diluição. Diluição dos 1ml da amostra gerada na etapa anterior em 9 ml de diluente em um novo tubo de ensaio, que por conta da diluição em 10 volumes igual aos que antes se encontrava, diminui a base de concentração do contaminante em 105 por ml. Uma base reduzida por meio da diluição da técnica executada, que gerou uma amostra com a base 105, uma menor concentração que pode ser utilizada para realizar estudos específicos a ela ou realizar alguma atividade laboratorial, como neste procedimento, que continuou os procedimentos de diluição em serie com o proposito de realizar uma contagem de viáveis de células.