Coloração Gram

INTRODUÇÃO

As bactérias são organismos unicelulares com tamanho microscópico que apresentam uma estrutura celular bastante simples e nem sempre tem as mesmas características sendo assim diferentes em forma, tamanho, virulência etc. Podem ser encontradas isoladas ou em colônias e muitas delas possuem estruturas extracelulares como flagelos ou cílios (organelas de locomoção). Outras podem possuir esporos, devido ao meio ambiente inadequado à sua condição de vida, esta é uma forma delas se materem vivas até encontrarem sua condição ideal de sobrevivência e existem ainda aquelas que não possuem esporos, são chamadas de vegetativas.

De forma geral, as bactérias aprentam entre suas organelas: cápsula, membrana plasmática, ribossomos, parede celular, DNA, flagelo e pílus. Elas podem ser classificadas em dois grupos: gram-positvas ou  gram-negativas.

Bacterias gram-positivas (cor roxa) possuem uma parede celular mais espessa e constituição química formada por poliptídeos, açúcares aminados e fosfato de ribitol.
          Exemplos: Bacilos, Estreptococos, Estafilococos, Enterococos.

Já as bactérias gram-negativas (cor vermelha) possuem a mesma constituição química das gram-positivas e, além disso, apresentam ainda 10 a 20% de lipóide. Este grupo forma o maior número de bactérias patogênicas.
          Exemplos: Escherichia coli; Salmonella ;Shigella

Para serem observadas em laboratório é necessária a preparação de meios de cultura que são composições de substâncias que fornecem nutrientes necessários para o crescimento de microrganismos e, também, um meio estéril, ou seja, um meio com ausência de microrganismos com vida. Existem vários tipos de meios de cultura utilizadas em determinada finalidade, características, estado físico, etc.

Depois de uma amostra coletada, ocorre o cultivo da amostra através de uma cultura simples, que permite o crescimento das bactérias presentes. Após seu crescimento, as bactérias são sujeitadas a testes como a coloração com Gram.

OBJETIVOS

• Conhecer os componentes de um microscópio
• Compreender o que é um campo de visão
• Aprender a manusear um microscópio ótico
• Observar células de bactérias
• Observar células de bactérias gram-positivas e gram-negativas
• Observar a diferença no formato das bactérias
• Realizar a contagem de colônias (UFC)

MATERIAIS E METODOS

MATERIAIS

• Béquer
• Bico de Bunsen
• Água destilada
• Álcool 70%
• Alça de Drigalski
• Alça de Platina
• Pipeta volumétrica de 10 ml
• Placa de Petri
• Pipeta automática de 100 µl
• Solução de violeta
• Lugol
• Fucsina/safranina

MÉTODOS

Iniciou-se o experimento com a coleta de 10 ml do efluente a ser analisado, por meio de uma pipeta volumétrica, que foi injetado em um recipiente com 90mL de água, e agitado algumas vezes afim de dissolvê-lo. Na sequência, retiraram-se 100µL dessa solução, com o auxilio de uma pipeta automática, despejando em um tubo de ensaio. Este, por sua vez, passou em um agitador de tubo de ensaio. Este último procedimento foi realizado com 4 tubos no total. Feito isto, ocorreu a transferência de 10µL de cada tubo de ensaio para duas placas pca com meio de cultivo. As placas foram identificadas e direcionadas á um forno de (tantos graus, que não me lembro kkk).