Análise de Alimentos

EMPREGO DE CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFECIÊNCIA HIDROFÍLICA NA DETERMINAÇÃO DOS AMINOÁCIDOS DE HIDROLISADOS DE CASEÍNA

Grupo: Carlos Calixto, Letícia Batista, Simone Amorim e Tábatta Leal

No estudo apresentado no artigo, testou-se o potencial do HPLC com interação hidrofílica (HILIC) na determinação dos aminoácidos essenciais empregando-se a coluna PHEA. Em seguida, esta técnica foi utilizada na análise de frações cromatográficas de hidrolisados de caseína.

Para a análise da composição em aminoácidos essenciais de hidrolisados protéicos, selecionou-se os três hidrolisados de caseína que apresentaram melhor perfil peptídico para suplementos dietéticos, que foram denominados apenas como H1, H2 e H3.

Os hidrolisados foram fracionados por HPLC-SE em coluna PHEA, e as quatro frações cromatográficas F1, F2, F3 e F4 foram coletadas utilizando-se o coletor automático. As quatro frações foram evaporadas a 35ºC no concentrador de amostras CENTRIVAP, e as frações F1, F2 e F3 foram hidrolisadas (HCl 5,7 mol/L, 110ºC, 24h). Após este tratamento, as amostras foram dissolvidas em fase móvel, filtradas em membranas e injetadas no sistema cromatográfico.

Para a determinação dos aminoácidos essenciais, utilizou-se inicialmente o sistema de HPLC, em modo isocrático. A fase móvel empregada consistiu de acetonitrila/trietilaminafosfato (10mmol/L) e pH 2,8 (70:30, v/v). A injeção da amostra (20 µL) foi efetuada manualmente, e a detecção ocorreu a 215 nm. A separação cromatográfica foi realizada a um fluxo constante de 1mL/min, a temperatura de 25ºC, não sendo possível conseguir uma boa separação dos oito aminoácidos essenciais e, ainda, obtendo-se um tempo de eluição muito longo, foram testados, posteriormente, outras condições de análise. O comprimento de onda a 215 nm foi o único parâmetro que permaneceu inalterado.

Tais alterações levaram à definição de uma fase móvel que permitiu a separação e identificação de todos os oito aminoácidos essenciais em um tempo de eluição de 46 min. Ao comparar o tempo total de corrida cromatográfica dos aminoácidos essenciais, e levando em consideração também o tempo de preparo das amostras, obtidos por dois métodos, observa-se que pela HILIC é mais rápida do que na HPLC-RP, pois não emprega a derivação.

Ao final, observou-se que a lisina foi o único aminoácido encontrado em todas as frações cromatográficas estudadas. A qualidade do H1 pode ser realçada, uma vez que, neste hidrolisado observou-se o maior conteúdo de aminoácidos essenciais, na forma de ditripeptídeos, dentre os casos estudados.

Concluiu-se então que a cromatografia líquida de alta eficiência hidrofílica (HILIC), através da coluna PHEA, revelou-se eficiente para a separação, identificação e quantificação dos aminoácidos essenciais.