Introdução A Eletroforese

LUCIENE MOREIRA DOS SANTOS RA 6451311289

ELETROFORESE

Anápolis

Setembro/2014

LUCIENE MOREIRA DOS SANTOS RA 6451311289

Anápolis

Setembro/2014

SUMÁRIO

Introdução.............................................................................................. 4

Objetivo ............................................................................................... 6

Materiais ........................................................................................ 6

Reagentes.............................................................................................. 7

Procedimentos....................................................................................... 8

Resultados............................................................................................. 9

Referencias Bibliográficas................................................................. 9

INTRODUÇÃO

Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa. Em alguns casos, o formato da moléculas também influi, pois algumas terão maior facilidade para migrar pelo gel. A eletroforese normalmente é utilizada para separar proteinas e moléculas de DNA e RNA. Foi introduzida cientificamente em 1939 por A.Tiselius e A.E. Kabat com o objetivo de separar partículas orgânicas. utilização de eletroforese no uso da rotina laboratorial tem sido importante para determinar hemoglobinopatias e talassemias, auxílio diagnóstico para doenças específicas, por ex.: mieloma múltiplo, além de aplicação em lipidogramas, biologia molecular e enzimopatias. Técnicas mais sensíveis, como é o caso da focalização isoelétrica permitem a separação de frações com excelente resolução.

Eletroforese em gel de agarose nesse caso, a agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas durante a migração.Dependendo da concentração de agarose, têm-se uma diferença no gradiente deseparação. Para preparar um gel de agarose, simplesmente faz-se a mistura entre o pó deagarose e solução tampão (TBE). Após fundir, coloca-se brometo de etidio, que fará o DNA ou RNA "brilhar" quando exposto ao UV. Quando a mistura esfriar o gel estará duro. Esse endurecimento é feito em um local apropriado, o mesmo local onde será feita a corrida da amostra. Um detalhe importante é a colocação do pente no gel durante o endurecimento. O pente cria poços que serão utilizados para a colocação das amostras. A eletroforese em gel é um dos métodos mais utilizados para analisar misturas de proteínas ou outras macromoléculas. Os géis utilizados como suportes são de agarose e poliacrilamida, podem ser preparados com porosidade variável, propiciando separação das moléculas segundo o seu tamanho, além da sua carga. Proteínas menores migram mais rápido que as maiores, formando uma serie de bandas definidas, que podem ser visualizadas com por coloração especifica .Uma variante desta técnica, conhecida pela sigla SDS-PAGE, emprega um gel de poliacrilamida, em presença do detergente dodecil sulfato de sódio (SDS). O SDS liga-3 se a radicais hidrofóbicos das proteínas, causando sua desnaturação. Esta associação, com a maioria das proteínas, segue o mesmo padrão: uma molécula de SDS a cada dois resíduos de aminoácidos. Além disso, cada molécula de detergente ligada atribui uma carga negativa a proteína desnaturada, mascarando a carga intrínseca da molécula nativa. O resultado, qualquer que seja a proteína, é a formação de um complexo com forma alongada, com a densidade de cargas negativas proporcional ao comprimento dacadeia polipeptídica. Este método, portanto separa proteínas segundo o seu peso molecular.

Se a proteína apresentar estrutura quaternária, suas subunidades serão desnaturadas e dissociadas por SDS e a eletroforese determinara o peso molecular de cada uma delas o emprego da eletroforese em gel, ao longo das diferentes etapas de um processo de purificação de proteínas, alem de permitir a sua separação, forneceinformações adicionais, tais como: o numero de proteínas presentes na preparação, oseu peso molecular e de quantas subunidades são formadas.Imagem do equipamento utilizado para eletroforese em gel.

OBJETIVO

Realizar eletroforese com soro sanguíneo humano (proteína Albumina).

MATERIAS

• Cuba de eletroforese

• Placa de petri

• Becker

• Capilares (com soro sanguíneo humano)

• Papel filtro

• Pinça