PLANO DE VALIDAÇÃO DO MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE NITRITO EM ÁGUA

PLANO DE VALIDAÇÃO DO MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE NITRITO EM ÁGUA

1-OBJETIVO

Validar o método de determinação de nitrito em água por espectrofotometria.

2-PRINCÍPIO DO MÉTODO DE ANÁLISE

O método baseia-se na reação do nitrito existente na amostra com o reagente colorimétrico sulfanilamida na qual a intensidade da cor obtida depende da concentração do analito na amostra. A quantificação é realizada a partir dos resultados dos valores de absorbâncias obtidos da leitura da amostra em espectrofotômetro a 543 nm. (Ver roteiro em anexo)

3-IDENTIDADE DO ANALITO

Nitrito (NO2-)

4-PADRÃO DE REFERÊNCIA

Nitrito de sódio com 99,99% de pureza

5- IDENTIDADE DA AMOSTRA

Amostra de água de torneira

6-CONDIÇÕES ANALÍTICAS AMBIENTAIS

Realizar os testes em laboratório de 20-25 ºC.

7- FIGURAS DE MÉRITO UTILIZADAS NA VALIDAÇÃO

7.1 Seletividade

A partir de uma solução padrão de nitrito dopar as seguintes quantidades na amostra de água de torneira e também na água ultra-pura de modo a obter 100 mL de cada solução:

Volume em µL	Concentração (%) adicionada na amostra	Concentração Teórica de nitrito
	baixa
	média
	alta

Para cada concentração fazer 3 vezes.

Analisar a amostra de água de torneira e ultra-pura antes de serem dopadas com nitrito para certificar a ausência do analito (3 réplicas).

Realizar o teste F e o teste t para cada nível de concentração entre a amostra de água da torneira dopada e a água ultra pura dopada. (Ambos os testes a um nível de 95% de confiança)

Caso o valor calculado seja maior que o tabelado no teste F, executar  o teste t para amostra com desigualdade entre as varianças para cada nível de concentração.

Se o valor calculado no teste F for menor ou igual ao tabelado, executar o teste t para igualdade de varianças.

Em caso de confirmar efeito matriz, fazer a curva de calibração para se obter a linearidade por padronização interna.

7.2 Linearidade e faixa linear de trabalho

A partir de um padrão de nitrito dopar as seguintes quantidades em ultra pura de modo a obter 100 mL de solução por concentração (para cada concentração fazer 3x):

Concentração desejada	Volume de solução padrão de nitrito

Para cada concentração fazer 3 vezes.

Analisar as réplicas de cada nível de concentração e plotar um gráfico de Concentração x Absorbância com os valores médios.

Verificar a homocedasticidade pelo método de Cochran. Se observar comportamento homocedástico obter a equação de regressão linear pelo Método dos Mínimos Quadrados Ordináros, caso seja heterocedástico obter pelo Método dos Mínimos Quadrados Ponderados.

Calcular o coeficiente de correlação R.

Determinar a sensibilidade do método pelo valor da inclinação.

Testar a equação obtida pela regressão linear com amostras de diferentes concentrações para obter o valor real e teórico de absorbância (estimado pela equação). Calcular os resíduos e plotar um gráfico resíduo x concentração, este gráfico deve apresentar comportamento aleatório.