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1. INTRODUÇÃO

Eletroforese é um processo de separação de substâncias eletricamente carregadas mediante a migração diferenciada delas quando as mesmas são dissolvidas em um eletrólito, através do qual é aplicada uma corrente elétrica. Essa técnica foi descoberta em 1937, pelo bioquímico sueco Arne Tisélius, que ganhou o Prêmio Nobel em 1948 por esse trabalho. Quando essas substâncias são as proteínassanguíneas, fala-se em eletroforese das proteínas.

A eletroforese de proteínas é de grande importância no diagnóstico diferencial de algumas enfermidades, na avaliação da gravidade de alterações clínicas hematológicas e no diagnóstico de processos inflamatórios, gamopatias e disproteinemias. É o teste mais utilizado para investigação de anormalidades proteicas presentes no sangue. Taxas elevadas de proteínas plasmáticas ocorrem em função da hemoconcentração ou do aumento da produção deglobulinas, geralmente associado a processos inflamatórios. A hemoconcentração pode ser fisiológica, em casos de contração esplênica e policitemia vera.

As principais proteínas encontradas nas bandas eletroforéticas são a albumina, alfa1-globulina, alfa2-globulina, betaglobulinas e gamaglobulinas.A albumina é a proteína mais abundante do plasma, responsável por cerca de 80% de sua pressão oncótica e pelo transporte de inúmeras substâncias, como a bilirrubina, o cálcio, os hormônios, os fármacos, etc. A quantidade dealbumina no plasma diminui por falha em sua síntese no fígado, por perda renal, intestinal ou cutânea ou por condições que aumentam a permeabilidade capilar, em estados de má absorção e subnutrição. A quantidade aumenta na desidratação ou por estase venosa excessiva.

A alfa-1-globulina atua na inibição de enzimas proteolíticas, podendo aumentar em processos inflamatórios agudos, em neoplasias e em doenças hepáticas e diminuir em virtude de um defeito genético grave, doença pulmonar ouhepática na infância.

A alfa-2-globulina elevada faz suspeitar de um processo inflamatório agudo ou de síndrome nefrótica e reduzida leva a pensar numa síndrome hemolítica.

A betaglobulina responde pelo transporte de ferro plasmático. Aumenta nos casos de carência de ferro e em processos inflamatórios e diminui em doenças autoimunes.

A gamaglobulina é a fração eletroforética de maior interesse clínico. Sua diminuição ocorre em casos de imunodeficiências e no mieloma múltiplo não secretor e seu aumento se dá na cirrose hepática, nas infecçõessubagudas e crônicas, doenças autoimunes, etc.

Os resultados da eletroforese das proteínas, correspondentes às frações separadas, são expressos em forma gráfica ou percentual de concentração das diversas frações e a interpretação deles fornece ao médico um importante auxílio no diagnóstico e acompanhamento de várias enfermidades.

2. OBJETIVO

Determinar as dosagens de proteínas totais em soro sanguíneo, através do método do Biureto, utilizando reagente de cor e solução padrão para a análise, e o espectrofotômetro para a leitura das amostras.

Bem como, realizar os procedimentos de eletroforese para a separação e identificação das proteínas analisadas, procedendo com uma eluição de cada fração proteica identificada.

3. MATERIAIS, REAGENTES E SOLUÇÕES

3.1 – MATERIAIS E REAGENTES

3.2 PROCEDIMENTOS

3.2.1 DOSAGEM DE PROTEÍNAS TOTAIS

Dosagem de proteínas totais pelo método de Biureto. Foram utilizados 3 tubos de ensaio: branco, padrão e amostra.

Branco

No primeiro tubo que é o branco foi adicionado 3 mL do reagente de cor, que apresenta cor azul. Foi levado tubo para o espectrofotômetro para zerar o aparelho já é a nossa amostra pura.

Solução Padrão

No segundo tubo de ensaio que é a padrão, adicionamos 3 mL do reagente de cor e 50 μl da solução padrão, foi feita a homogeneização da solução que apresentou cor azul-escuro e aguardamos 10 minutos. Posteriormente a solução foi levada para o espectrofotômetro para fazer a leitura em 540 nm, o resultado obtido foi 0,146.

Amostra

No terceiro tubo contendo a amostra foi adicionado 3 mL do reagente de cor e 50 μl do soro (amostra do paciente), foi feita a homogeneização da solução que apresentou cor azul-escuro e esperamos 10 minutos. A solução foi levada para o espectrofotômetro para fazer a leitura em 540 nm, o resultado obtido foi 0,304.

3.2.2 ELETROFORESE

É o método para separar as proteínas de acordo com suas cargas, onde as proteínas na fita migrarão do polo negativo para o polo positivo.

Na cuba de eletroforese colocamos a solução tampão que tem pH de 9,5 (alcalino) e mergulhamos as fitas de acetato de celulose para que elas para adquirir o pH do tampão.

Depois retiramos as fitas do meio utilizando uma pinça, com um papel retiramos o excesso do tampão da fita e colocamos sobre o cavalete na cuba de eletroforese.

Em um vidro de relógio foi colocada a amostra do paciente e utilizando um aplicador que a ponta foi molhada na amostra colocamos na fita que está na cuba de eletroforese no polo negativo para que as proteínas migrem para o polo positivo.

Posteriormente foi feita a coloração utilizando o corante negro de amido, a fita