Relatório de aula pratica - DNA de células vegetais

1 Introdução

O DNA (ácido desoxirribonucleico) é a parte mais importante de cada célula. É encontrado no núcleo de toda célula humana e nele estão contidas todas as informações relativas à construção e ao funcionamento do organismo. Ele tem formato de dupla hélice, com ligações entre suas bases nitrogenadas.

Nessa aula prática foi-nos proposto um experimento para extração e identificação do DNA das células vegetais. Tivemos que comparar os métodos utilizados na extração do mesmo e identificar quimicamente esse DNA.

2 Extração e identificação do DNA

2.1 Materiais

. Banana                                                                  . Tubo de ensaio

. Saco plástico (zip bag)                                          . Proveta 100 ml

. NaCl                                                                      . Becker de 100 ml

. Detergente incolor                                                 . Filtro de papel

. Gelo                                                                       . Palito de madeira

. Água destilada                                                       . Banho-maria

. Álcool etílico gelado a 95%                                   .Termômetro

. Pipeta Pasteur                                                       . Funil

. Reagente de benedict

2.2 Métodos para extração do DNA

1. Utilizamos o saco plástico para amassar cerca de 1/3 de uma banana;

2. Em um becker, adicionamos 50ml de água destilada, uma colher de chá de detergente incolor  e uma colher de chá (aproximadamente 5g) de NaCl e mexemos, com cuidado pois poderia gerar espumas;

3. Acrescentamos a banana amassada à mistura do becker;

4. Colocamos o tubo em banho-maria a 60°C por cinco minutos;

5. Depois resfriamos a solução colocando-a em um recipiente com gelo por três minutos, mexendo cuidadosamente;

6. Colocamos o papel de filtro dentro de um funil e colocamos ambos em um becker;

7. Depois de misturarmos bem a solução por alguns minutos, passamos o líquido pelo papel filtro;

8. Colocamos cerca de 10 ml do filtrado dentro de um tubo de ensaio;

9. Adicionamos álcool gelado (o dobro da quantidade filtrado) ao tudo de ensaio devagar, escorrendo lentamente pela parede do tubo;

10. Aguardamos cerca de 3 minutos para o DNA precipitar;

11. Usamos um palito de madeira para enrolar as moléculas de DNA.

2.3 Métodos para identificação do DNA:

. Retiramos o DNA com um palito e o transferimos para um tubo de ensaio;

. Adicionamos 2 ml do reagente de benedict ao tubo de ensaio e aquecemos o mesmo em banho-maria;

. Observamos e comparamos com um tudo controle.

2.4 Questões

1. Comente sobre a função de cada um dos fatores abaixo relacionados na extração do DNA:

a. Álcool gelado - o álcool desidrata o DNA, de forma que este não mais fica dissolvido no meio aquoso. Além disso, o DNA tende a não ser solúvel em álcool e, deste modo, suas moléculas se agrupam. Como o DNA tem menor densidade que os outros constituintes celulares, ele surge na superfície do extrato. Quanto mais gelado o álcool, menos solúvel será o DNA.

b. Detergente - As membranas plasmática e nuclear são compostas principalmente por lipídios. A função do detergente é desestruturar as moléculas de lipídio das membranas biológicas. Desta maneira, as membranas sofrem ruptura e todo o conteúdo celular - inclusive o DNA - fica disperso na solução.

c. Sal - A adição do sal (NaCl) no início da experiência proporciona um ambiente favorável para a extração, pois o sal, depois de dissolvido na água, se dissocia e contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As moléculas de DNA passam a não sofrer repulsão de cargas entre si, o que favorece sua aglomeração.

d. Assim como o sal, a temperatura serviu de fator desnaturante para precipitar as proteínas presentes.

2. Por que se deve macerar bem o vegetal utilizado?

As frutas devem ser maceradas (amassadas) para que a parede celular (estrutura espessa e rígida presente em células vegetais) seja rompida.

3. O que se consegue ver seria o DNA puro?

Esta atividade tinha como objetivo apenas a extração e posterior visualização de um aglomerado de DNA presente em tecidos vegetais e, portanto, não resultou no DNA completamente purificado do restante dos componentes celulares.