Reações de Coloração de Aminoácidos

Professor Alexandre Soares dos Santos DCB/UFVJM 2007 1 Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde Departamento de Ciências Básicas Disciplina: Bioquímica AULA PRÁTICA Nº 4 – REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS Nesta aula serão empregadas diversas reações que permitem identificar algumas cadeias laterais de resíduos de aminoácidos componentes das proteínas da gelatina e da clara de ovo. REAGENTES • Clara de ovo • Gelatina (sem sabor) a 2 % • Solução de NaOH a 2,5 mol/L; 6,0 mol/L e a 4 % • Solução de acetato de chumbo a 10 % • Reativo de Millon • Reativo de Hopkins Cole • Solução alcoólica de alfa-naftol a 0,4 % • Solução de hipoclorito de sódio a 6,0-7,0 % • Reativo de biureto • Solução de ninhidrina a 0,1 % • Ácido nítrico concentrado • Ácido sulfúrico concentrado • Ácido acético concentrado • Tubos de ensaio • Pipetas de 1,0; 2,0; 5,0 mL PROCEDIMENTOS 1) Reação de aminoácidos sulfurados • Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina. • Adicione 1,0 mL de solução de NaOH a 6,0 mol/L. Aqueça os tubos em chama direta. • Adicione gotas de ácido acético concentrado e de acetato de chumbo a 10%. • O que ocorreu? 2) Reação de Millon • Coloque 1,0 mL de solução de clara de ovo em um tubo de ensaio e 1,0 mL da solução de gelatina em outro. • Adicione 1,0 mL do reativo de Millon a cada um deles e aqueça em chama direta por 30 s. • Observe o aparecimento de uma coloração vermelho tijolo. • Os fenóis, quando aquecidos com sais mercuriais, formam derivados mercuriais que, em presença de HNO3, sofrem nitração, formando compostos de coloração vermelho tijolo. A tirosina é o único aminoácido encontrado em proteínas que contém grupo Professor Alexandre Soares dos Santos DCB/UFVJM 2007 2 fenólico. Portanto, somente as proteínas que contém tirosina dão a reação de Millon positiva. 3) Reação de Hopkins-Cole • Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina. • Acrescente 3,0 mL do reativo de Hopkins-Cole a cada um deles. • Incline os tubos e adicione 2,0 mL de ácido sulfúrico concentrado (20 gotas = 1,0 mL), deixando escorrer pela parede dos tubos. (fazer na presença do professor) • Aguardar alguns minutos e observar a formação de um anel violeta se houver a presença de triptofano na proteína. • Na presença de ácidos, muitos aldeídos se condensam com o anel indólico do triptofano, formando compostos coloridos. Na reação de Hopkins-Cole, as proteínas que contém triptofano reagem com o ácido glioxílico (que contém um grupamento aldeídico ligado a uma carboxila) e, pela ação do H2SO4 concentrado, formam composto de cor violeta, na interface. 4) Reação de Sakagushi • Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina. • Adicione 1,0 mL de NaOH 2,5 mol/L. • Acrescente 0,5 mL de alfa-naftol a 0,4% e 1,0 mL da solução de hipoclorito de sódio. • Os aminoácidos que contém produtos de substituição das guanidinas dão coloração vermelha quando tratadas com alfa-naftol e hipoclorito de sódio. É o caso das proteínas que contém arginina. 5) Reação do biureto

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