Efeito da Concentração de Substrato na Velocidade da Reação da Enzima Sacarase

[pic 1]

Efeito da Concentração de Substrato na Velocidade da Reação da Enzima Sacarase

FARMÁCIA

Maicon C. Ruppenthal

Bioquímica I | 14/11/2020

1 INTRODUÇÃO

Enzimas são catalisadores biológicos que aceleram a velocidade das reações químicas conduzidas pelos organismos vivos, tornando a velocidade das mesmas compatíveis com as exigências metabólicas. A maioria das enzimas são proteínas globulares que apresentam especificidade tanto por seus substratos (a molécula que vai sofrer a reação química) como para o tipo de reação efetuada sobre o substrato. Essa especificidade da enzima se deve a uma cavidade ou fenda de ligação do substrato, denominada sítio ativo. O sítio ativo é um arranjo de grupos químicos das cadeias laterais de aminoácidos que ligam o substrato por interações não-covalentes, localizado na sua superfície da enzima.

A capacidade catalítica de uma enzima é modulada pelos seguintes fatores: pH, temperatura, concentração de Substrato [S], concentração de Enzima [E] e concentração de produto [P]. Quanto mais próximo do pH e da temperatura ótima da enzima, maior a velocidade da reação. Quanto maior a [S], maior a velocidade da reação, até o ponto de saturação, onde a velocidade não aumenta mais. O mesmo acontece com o aumento da [E], que acarreta em aumento da velocidade da reação até um ponto de saturação. O aumento da [P] leva a uma diminuição da velocidade de reação.

A sacarase é uma enzima do suco entérico, que é produzida na parede do duodeno e tem como função catalisar a hidrólise da Sacarose (dissacarídeo) em Glicose e Frutose (dois monossacarídeos). Ela pode ser utilizada em laboratório para determinação do efeito da concentração de substrato na velocidade da reação enzimática.

2 MATERIAIS E METÓDOS

2.1 MATERIAIS

1Becker de 50 mL

5 pipetas de 1 mL

1 pipeta de 10 mL

11 tubos de ensaio

1 Cronômetro

1 Tenaz

1 Pêra de sucção

Espectrofotômetro a 540 nm

Tampão de acetato de sódio ph 4,7

   Cubetas para espectrofotômetro

Banho-maria (temperatura: 33 – 45 grau ºC e 100 grau ºC)

  Solução de sacarose 0,01 mol/L 0,02 mol/L 0,03 mol/L 0,04 mol/L e 0,05      mol/L

Sacarase 0,5%

Acido – 3,5 – dinitrosalicílico

Água destilada

Gelo

2.2 METÓDOS

A atividade sobre enzimas foi dividida em duas etapas:

Prática 1: Efeito da concentração do substrato na velocidade de reação da enzima sacarase.

Inicialmente, foram numerados seis tubos de ensaio com as seguintes marcações: T1, T2, T3, T4, T5 e T6, contendo as respectivas soluções:

• T1 – 1,4 mL de tampão

• T2 – 0,9 mL de tampão + 0,5 mL de solução sacarose 0,01 mol/L

• T3 – 0,9 mL de tampão + 0,5 mL de solução sacarose 0,02 mol/L

• T4 – 0,9 mL de tampão + 0,5 mL de solução sacarose 0,03 mol/L

• T5 – 0,9 mL de tampão + 0,5 mL de solução sacarose 0,04 mol/L

• T6 – 0,9 mL de tampão + 0,5 mL de solução sacarose 0,05 mol/L

Após as soluções serem feiras nos seus respectivos tubos, foram adicionados 0,5mL de sacarase 0,5% em todos os tubos, agitando-os e deixando-os incubados por 5 minutos a temperatura ambiente.

Terminados 5 minutos de incubação, foram adicionados 1,0mL de acido 3,5 dinitro salicílico em cada tubo, levando-os para banho-maria (100 grau C) durante 5 minutos.

Logo após os 5 minutos de banho-maria, os tubos foram resfriados em água corrente. Posteriormente foram adicionados 7,5mL de água destilada em cada um e em seguida, foi feita a leitura no espectrofotômetro a 540 nm, utilizando solução T1 como branco.

Prática 2: Efeito da temperatura na velocidade da reação da enzima sacarase.

Primeiramente, foram numerados cinco tubos de ensaio contendo as seguintes soluções em casa:

• 0,8 mL de tampão em todos os tubos

• 0,2 mL de sacarase em todos os tubos

• 0,5 mL de água destilada somente no tubo 1

• 0,5 mL de sacarose 0,05 mol nos tubos de ensaio 2, 3, 4 e 5;

Após as soluções serem preparadas, agitamos os tubos e cada tubo foi encubado por 5 minutos em temperatura especifica.

Tubo 1: Temperatura ambiente;

Tubo 2: 0 grau C;

Tubo 3: 33 graus C;

Tubo 4: 45 graus C;

Tubo 5: 100 graus C.

Retirados os tubos das incubações, foi adicionado 1,0mL de ácido-3,5-dinitro salicílico em cada um, levando-os a banho-maria a 100 grau C por 5 minutos.

Passados os 5 minutos de banho-maria, os tubos foram resfriados em água corrente. Posterior foi adicionado 7,5mL de água destilada em cada tubo e em seguida foi feita a leitura no espectrofotômetro a 540 nm, utilizando o tubo 1 como branco.

3 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Resultados encontrados na prática 1:

Quadro 1: Resultado das leituras em espectrofotômetro com diferentes concentrações de substrato (Sacarose):

                         Tubo Concentração de Substrato Absorvância

1	0	0
2	0,01 mol/L	0,190
3	0,02 mol/L	0,250
4	0,03 mol/L	0,300
5	0,04 mol/L	0,420
6	0,05 mol/L	0,500