Espectrofotometria

Espectrofotometria:

Método de análise quantitativa que se baseia na comparação da cor produzida por uma reação química com uma cor padrão. De acordo com a intensidade da cor produzida, infere-se a concentração do determinado analito (substância que se quer analisar). O método mais seguro de se verificar a coloração de uma reação é através do uso do espectrofotômetro, que compara a intensidade de cor com uma cor padrão, chamada de “branco” (solução padrão em que o espectrofotômetro é zerado). É o método mais usado em análises laboratoriais de bioquímica clínica.

Determinação de glicose pelo método da O-toluidina:

Nesse método a glicose reage com a o-toluidina (orto-toluil) em meio ácido e a quente, resultando glicosamina e base de Schiff correspondentes. Esta reação desenvolve cor azul que é proporcional à quantidade de glicose até 200 mg/dL presente na amostra que pode ser soro, plasma, urina ou liquor. Os valores normais do soro ou plasma é de 75 a 110mg/dL, sangue total de 80 a 120 mg/dL e urina zero.

A dosagem de glicose é amplamente utilizada na determinação da glicemia. Esta dosagem torna-se extremamente importante no diagnóstico de doenças como a diabetes mellitus (tipo 1 e tipo 2), diabetes mellitus gestacional, diabetes tipo MODY.

Para o diagnóstico do diabetes, devem ser seguidos métodos e critérios específicos dos quais irão determinar glicemia casual, glicemia de jejum, glicemia pós-prandial, glicosúria entre outros sinais clínicos

Determinação de Lipídios Totais:

Os lipídios totais incluem os triacilgliceróis, colesterol e seus ésteres, ácidos graxos não esterificados, fosfolipídeos, hormônios esteroidais e vitaminas lipossolúveis. O material que é utilizado é o soro do qual é aquecido em banho-maria fervente em presença de ácido sulfúrico concentrado. O reativo de fosfo-vanilina reage com uma fração de soluça sulfúrica, para formar um composto de coloração rósea, cuja intensidade de cor é proporcional à concentração de lipídios totais da amostra, sendo os valores normais de referência de 20 a 30 anos de idade de 400 a 700 mg/dL e acima dos 30 até 900 mg/dL e a leitura espectrofotométrica deve ser feita entre 500 a 550 nm.

Determinação de Colesterol Total:

Tem como princípio a precipitação de proteínas pelo anidro acético, retirando a água de solvatação das mesmas e, ao mesmo tempo, contribuindo para a formação de um complexo. Com a adição de ácido sulfúrico, o mesmo o dissolve precipitado, pois baixa o pH além do ponto isoelétrico das proteínas. Pela desidratação que ocorre no nível insaturado do núcleo do colesterol, forma-se um derivado sulfônico de coloração verde, cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração de colesterol existente na amostra.

Determinação de Ureia:

A ureia constitui 45% do nitrogênio não-proteico no sangue. É sintetizada no fígado a partir do dióxido de carbono e amônia, sendo esta proveniente da desaminação dos aminoácidos, em todos os tecidos, como produto final do catabolismo proteico. Após sua síntese hepática, a ureia é transportada pelo plasma até os rins, onde é rapidamente filtrada pelos glomérulos, é excretada na urina, embora mais de 40% seja reabsorvida por difusão passiva durante a passagem do filtrado pelos túbulos. O nível no plasma é notadamente afetado pela função renal, pelo conteúdo proteico da dieta e pelo teor de proteólise.

O fundamento da determinação da ureia é baseado na hidrólise ácida da diacetilmonoxima