Cinética Enzimática em Placa de 96 Poços

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Coordenadoria de Biotecnologia

Curso de Bioquímica

Prática: Cinética Enzimatica em Placa de 96 Poços

Alunos: Anderson Martins, Caio Vinicius, Gabriel Almeida e Rafael Ferreira

Turma: QM 161

Professores: FabríciaFonsenca; Marcio Loureiro

Data da realização da prática: 23/09/2019

Data da entrega do relatório: 07/09/2019

Avaliação:

Critério:	Nota:
Apresentação
Introdução
Objetivos
Métodos
Resultados
Discussão
Bibliografia
Total:

Sumário

1.        Introdução        2

2.        Objetivos        4

3.        Materiais e Métodos        4

3.1        Materiais        4

3.2        Construção de uma curva padrão de PNP        5

3.3        Curso temporal        6

3.4        Influência da temperatura        6

3.5        Influência do pH        7

3.6        Curva de substrato        8

3.7        Influência do inibidor        9

4.        Resultados (gráficos aqui)        11

4.1        Construção de uma curva padrão de PNP        11

4.2        Curso temporal        12

4.3        Influência da temperatura        13

4.4        Influência do pH        13

4.5        Curva de substrato        13

4.6        Influência do inibidor        14

5.        Discussão        14

5.1        Construção de uma curva padrão de PNP        14

5.2        Curso temporal        14

5.3        Influência da temperatura        15

5.4        Influência do pH        15

5.5        Curva de substrato        15

5.6        Influência do inibidor        15

6.        Conclusão        15

7.        Referências bibliográficas        15

1. Introdução

“As enzimas estão no centro de cada um dos processos bioquímicos. Atuando em sequências organizadas, elas catalisam cada uma das reações das centenas de etapas que degradam as moléculas dos nutrientes, que conservam e transformam energia química e que constroem as macromoléculas biológicas a partir de precursores elementares” Trecho retirado do livro Princípios de Bioquímica de Lehninger [1].

Uma característica marcante das enzimas é que a maioria destas é proteica (a exceção são as ribozimas).  As enzimas são classificadas segundo as reações que catalisam como oxidorredutases, transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases.

De maneira geral, as enzimas aceleram a velocidade das reações que ocorrem nos organismos. Isso acontece por que elas possuem um fator de aceleração que diminui a energia de ativação das reações, tornando possível que uma reação que demoraria cem anos ocorra em questão de horas ou até mesmo minutos por exemplo. Outra característica marcante das enzimas é que elas não alteram os equilíbrios das reações, apenas aceleram a fase de transição das mesmas e conservam suas energias.

Assim como as proteínas, as enzimas sofrem influência de temperatura e pH, tendo esses dois fatores pontos ideias para a máxima eficiência das mesmas. Pensando nisso, pode-se chegar ao conceito de velocidade de reação. Em uma reação catalisada por enzimas ocorre a formação de complexos Enzima-Substrato, Enzima-Produto, que são as fases de transição (o mesmo pode ocorrer no sentido contrário da reação). A alteração da energia livre da reação é o que vai determinar o equilíbrio e o sentido favorável da reação química.

A respeito da velocidade de reação, entende-se que ela é determinada pela quantidade de produto formado ao longo do tempo e o gasto do substrato. Como foi falado anteriormente, o pH e a temperatura influenciam na velocidade, mas também há influência da concentração do substrato. Essa velocidade não é constante, a mesma apresenta variações durante a reação (diminui progressivamente) e a partir desse fator é determinada a velocidade mínima (V0) e máxima (Vmax).

Os fatores temperatura e concentração acabam por aumentar a velocidade da reação até que seja alcançada a Vmáx, porém há um limite para esse aumento de temperatura, pois pode ocasionar a desnaturação da enzima. A explicação para a diminuição da velocidade de reação no ponto de Vmax se dá pelo fato da enzima estar 100% saturada.

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