ESTUDOS BIOQUÍMICOS EM CARBOIDRATOS

ESTUDOS BIOQUÍMICOS EM CARBOIDRATOS.

L. Grupo Protético de Córneamucóide.

Por

MASAMI SUZUKI

(Do instituto médico-químico, Universidade Imperial de Hokkaido,

Sapporo. Diretor: Prof. H. Masamune.)

(Recebido para publicação, 13 de fevereiro de 1939)

Levene e López-Suárez colocaram o agrupamento de carboidratos do mucoide da córnea junto com os funis e mucinas vítreas sob um subgrupo de ácidos mucoitinsulfúricos em sua classificação; enquanto Karlberg afirmou recentemente que era um polissacarídeo composto de glucosamina e uma espécie de hexose, provavelmente manose, na proporção de 1 a 1. Ele baseou suas conclusões em análises de suas preparações mucóides, que continham 7,7% de glucosaminae 8,0% “manose”, com apenas 0,3% de sulfato de S separável por hidrólise.

Com o intuito de esclarecer esse problema, a princípio o autor preparou o mucóide da mesma maneira para Morner, mas comecei com um tecido que havia sido primeiramente seco com álcool e fiz análises de acordo com os procedimentos de nosso laboratório. Os resultados não afirmaram nenhuma das afirmações anteriores, pois as preparações envolviam glucosamina e galactose em uma proporção equivalente; e, além disso, sulfato-S na mesma proporção, enquanto o ácido glucurônico não foi encontrado.

Karlberg disse que o enxofre na forma de sulfato era de apenas 0,22 equivalente a glucosamina em sua preparação. De acordo com as experiências dos autores, no entanto, esse radical inorgânico, quando combinado com açúcar, é dividido com dificuldade comparativa e, como já mencionado, e além disso são necessárias pelo menos 6 horas para a precipitação completa de BaS04. Suspeita-se que Karlberg e Morner, que insistiram na completa ausência de sulfato-S, possam não ter amplificado essas condições analíticas. No segundo empreendimento, tentei isolar o complexo de carboidratos do mucóide, seguindo os procedimentos de Levene e López-Suárez.

1. Karlberg e Morner, isolaram complexos de carboidratos diretamente dos tecidos, não apenas da córnea, mas também dos outros tipos de material animal.

Embora as preparações obtidas não fossem suficientemente puras, os constituintes do complexo permaneceram nelas nas mesmas proporções que no mucóide. As razões equivalentes de nitrogênio para sulfato-S foram 2,76 e 3,42, assemelhando-se às relações correspondentes nas amostras que Levene e López-Suárez assumiu como ácido mucoitinsulfúrico sem decidir se o ácido urônico, um constituinte característico do ácido itinsulfúrico, estava envolvido. Esses autores atribuíram o baixo teor relativo de enxofre à sua instabilidade na ligação ao carboidrato. Os valores de nitrogênio em suas substâncias, pelo contrário, me parecem muito altos, devido às impurezas que contêm esse elemento.

É interessante que o complexo hexosamina-hexose que é livre de ácido glucurônico existe em algumas glicoproteínas como um sulfato etéreo, da mesma forma que está bem estabelecido na condroitina e mucoitina.

Meyer e Palmer anexados a uma de suas comunicações nas glicoproteínas, uma nota dizendo que eles poderiam isolar da Córnea uma substância com a composição de ácido mucoitina sulfúrico. Os detalhes ainda não foram publicados.

PREPARAÇÃO EXPERIMENTAL

1. Mucóide.

As córneas (dos olhos das vacas) foram removidas da screla e a substância própria foi separada da camada epitelial e da membrana de Descemet mecanicamente e depois desidratada colocando álcool a 95% por vários dias. A partir de 1440 córneas foram assim obtidos 90 gm. de discos secos.

Os discos secos forma cortados com tesoura e, após a adição solução alcoólica de timol, agitada em água fria (1300 cc. por 10 mg. do material) com agitador por 5 dias.

Morner empregou a solução de hidróxido de potássio e água amônia além da água isolada.

O resíduo foi extraído novamente por 3 dias, renovando a água; e aos extratos combinados, que reagiram de maneira neutra, adicionamos 30% de ácido acético até o pH baixar para 1,6. Os depósitos que apareceram foram suspensos em água (200 cc. quando a preparação foi iniciada com 10 mg. do material), dissolvido por meio de uma solução diluída de K2CO3, sendo o pH mantido em 8,0 e reprecipitado com ácido acético, após centrifugação da parte insolúvel. A purificação foi repetida mais uma vez da mesma maneira, mas desta vez não foi necessário álcali para dissolução. A substância foi então lavada com álcool e éter e finalmente seca sob vácuo sobre P2O5. O rendimento de Prep. I (a partir de 10 g de material) foi de 150 mg e o de Prep. II (material: 31 mg). 0,6 mg. Para acrescentar uma observação explicativa, o mucóide não formou soluções viscosas na água e foi precipitado sempre na forma de rebanho, como observou Morner. A precipitação ocorreu mais facilmente na presença do que na ausência de cloreto de sódio, que é justamente o contrário do caso de funis de mucina.

1. O agrupamento de carboidratos.

A separação foi realizada com base no princípio que Levene e López-Suárez adaptaram para isolá-lo do tecido, exceto que, na fase final, o produto foi tratado posteriormente com clorofórmio e álcool amílico, como segue:

Recolheram-se 300 mg do mucóide em 20 cm3. solução de NaOH a 1,5% e ficou à temperatura ambiente. Após 3 dias, a solução foi acidulada com ácido acético a 30% e aquecida com um excesso de pó de BaCO3 em um banho por 2 dias, com agitação ocasional. A água era adicionada de tempos em tempos e finalmente era centrifugada. A substância em vista foi então precipitada do líquido acastanhado sobrenadante com 30 volumes de ácido acético glacial. O depósito foi lavado 10 vezes com álcool, amassado com 3 cm3. de clorofórmio durante 2 horas e, em seguida, 15 cm3. de água e 1 cc. de álcool amílico foram adicionados adicionalmente, seguidos de agitação por 12 horas. Após centrifugação da mistura, a substância foi precipitada da camada aquosa, como mencionado acima, com ácido acético glacial, lavada com álcool e éter e seca sob vácuo (Prep. I) e foi obtida uma colheita de 40 mg. E também o precipitadoII foi preparado a partir de 0,5 g. do mucoide e o rendimento foi de 50 mg.