MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOS

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ANDRÉ FELIPPE DE ALMEIDA XAVIER

DAVE DI EVERTON RUFINO DOS SANTOS

MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOS

(técnica da coloração de Gram)

Relatório de aula prática apresentado ao Curso Técnico Subsequente em Química, da Coordenação de Química, do Instituto Federal de Alagoas, como requisito para obtenção parcial da nota da disciplina de Microbiologia.

MACEIÓ-AL

DEZEMBRO DE 2015

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO__________________________________________________________3
2. OBJETIVOS_____________________________________________________________3

1. GERAL_____________________________________________________________3
2. ESPECIFICO_________________________________________________________3

1. MATERIAL E MÉTODOS___________________________________________________3

1. MATERIAL__________________________________________________________3
2. MÉTODOS__________________________________________________________4

1. RESULTADO E DISCUSSÕES________________________________________________5
2. CONCLUSÃO___________________________________________________________5
3. ANEXOS_______________________________________________________________6
4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS_____________________________________________8

1. INTRODUÇÃO

        

        A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram e é a coloração diferencial mais utilizada em bacteriologia. Gram observou que as bactérias adquiriam cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classificá-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de Gram-positivas (Gram+), e as que ficavam vermelhas, chamadas de Gram-negativas (Gram-).

        O princípio da técnica está baseado na diferença de composição da parede de diferentes bactérias e na capacidade destas paredes em reterem os corantes utilizados. Sabemos hoje que as bactérias Gram+possuem uma parede celular mais espessa, fixando melhor o corante, diferentemente das bactérias Gram-, que apresentam uma parede celular mais delgada, que não retém tão bem o primeiro corante. No fim de todo o processo de coloração, é utilizado um microscópio óptico para fazer uma análise, de acordo com a coloração, quais bactérias estão presentes no meio de cultura.

        

1. OBJETIVOS

1. GERAL

• Adquirir conhecimento teórico e prático da técnica de coloração de Gram.

1. ESPECÍFICOS

• Aprender a preparar um esfregaço;
• Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;
• Desenvolver a habilidade para utilizar o microscópio óptico.

1. MATERIAL E MÉTODOS

1. MATERIAL

• Lâminas;
• Culturas Bacterianas em meio líquido e sólido;
• Alças e agulhas;
• Bateria de Coloração de Gram (corante cristal de violeta e fucsina, lugol, álcool, água destilada);
• Microscópio;
• Bico de Bunsen.

1. MÉTODOS

1. Preparação da Cultura (não lembro)

1. Preparo da Lâmina de Vidro

• Lava-se a lâmina de vidro com água e sabão, enxagua-se exaustivamente em água e acomoda-se a lâmina em um recipiente com etanol a 95%;
• Retira-se a lâmina com uma pinça e seca-se com um papel toalha.

1.  Preparo do Esfregaço em meio Líquido (Ver Anexo 1)

• Retira-se do tubo de ensaio, com a alça de platina, de uma a três gotas de meio de cultura;
• Coloca-se sobre a lâmina previamente limpa;
• Para fixar o esfregaço na lâmina, passa-se três vezes a lâmina de vidro, com o esfregaço voltado para cima, sobre a chama do bico de Bunsen.

1.  Procedimento utilizado na Coloração de Gram (Ver Anexo 2)

• Cora-se o esfregaço com cristal violeta por 60 segundos;
• Remove-se o corante com água destilada;
• Coloca-se a solução de lugol sobre o esfregaço durante 60 segundos;
• Remove-se a solução de lugou com água destilada;
• Lava-se o esfregaço com etanol 95% até que o etanol que escorre da lâmina fique transparente;
• Remove-se o etanol com água destilada;
• Adiciona-se Fucsina por 45 segundos;
• Remove-se a solução de Fucsina com água destilada;
• Seca-se com papel-filtro.

1. RESULTADOS E DISCUSSÕES

Foi possível a visualizar a coloração violeta, por se tratar de lactobacilos que são bactérias Gram-positivas, estas possuem uma camada única camada formada por peptideoglicano, o que as tornam mais rígidas do que as bactérias Gram-negativas.

Dessa forma ao adicionarmos o corante cristal violeta na lamina, todas as bactérias adquirem a coloração violeta, após lavou-se com água e adicionou-se o lugol para fixar o corante, porém quando lavado com álcool, ocorre à descoloração das bactérias Gram-negativas, já as Gram-positivas por possuírem suas paredes rígidas não são descoloridas, permanecendo com a coloração violeta.  Após foi adicionado uma solução de fucsina (corante de coloração magenta), colorindo assim apenas as bactérias gram-negativas.