A Espectrofotometria na Nutrição

1. INTRODUÇÃO

Os princípios da espectrofotometria, método que quantifica substâncias e sua concentração em determinada solução, são baseados na quantidade que o composto absorve e transmite luz em um comprimento de onda específico, quando esta passa por ele. As propriedades do composto, quanto mais concentradas, maior será a absorção de luz.

Na análise em questão, fora utilizada como amostra a albumina, proteína presente em grande quantidade na clara dos ovos, solúvel em água, e também presente no sangue humano, chamada de seroalbumina e sendo produzida no fígado.

A Curva de Calibração, é um processo de comparação, entre dois ou mais valores, entre o valor de referência, e o valor segundo o sistema de medição em questão, na química, é utilizada as medições do Material de Referência Certificado, MRC, buscando a homogeneidade de resultados. Absorbância, seria a capacidade de um material, de absorver luz para si.

2. OBJETIVOS

Objetivo geral teve como abordar a Espectrofotometria como método analítico na determinação da concentração, e os objetivos específicos conseguintes:

A- Determinar e elaborar a curva de absorção do biureto em presença da Albumina;

B- Mostrar a curva como auxílio no programa EXCEL;

C- Exercitar a prática de diluição na determinação da concentração;

D- Determinar a quantidade de proteína albumina por ml de clara de ovo.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Os reagentes utilizados foram: concentração de albumina obtida da clara de ovo, água destilada e biureto. No procedimento foi numerado 6 tubos de ensaio, em cada um tendo a solução específica, da seguinte forma:

Tubo 1: 2ml de albumina + 8ml de água destilada + 5ml de biureto;

Tubo 2: 4ml de albumina + 6ml de água destilada + 5ml de biureto;

Tubo 3: 6ml de albumina + 4ml de água destilada + 5ml de biureto;

Tubo 4: 8ml de albumina + 2ml de água destilada + 5ml de biureto;

Tubo 5: 10ml de albumina + 0ml de água destilada + 5ml de biureto;

Tubo 6: 0ml de albumina + 10ml de água destilada + 5ml de biureto;

Após os tubos de ensaio estiverem com suas devidas soluções preparadas, ficaram em repouso por 10 minutos depois de serem agitados para obter uma melhor diluição.

Usando a fórmula C1xV1=C2xV2 calculou-se a ‘’concentração final’’ de cada um anotando-se o resultado disposto abaixo:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

5x2=C2x10 5x4=C2x10 5x6=C2x10 5x8=C2x10

10=C2 10 20= C2 10 30= C2 10 40=C2x10

C2= 1 C2= 2 C2= 3 C2= 4

Tubo 5 Tubo 6

5x10=C2x10 BRANCO.

50=C2x10

C2= 5

Dando continuidade ao experimento usou-se o equipamento Espectrofotômetro para determinar a curva de absorção do reagente biureto em presença da albumina.

4. RESULTADOS E DISCUSSÕES

Para determinar a curva de calibração o Espectrofotômetro foi ligado, e a solução preparada no Tubo6 (branco) foi colocada em uma cubeta limpa e enxuta para calibrar/zerar o equipamento nos diferentes tipos de onda a serem analisados antes da leitura dos próximos tubos, e em seguida deixando o equipamento em 540nm na tela deste. Para cada conteúdo no tubo de ensaio a ser analisado a cubeta era lavada com água destilada e enxugada com papel toalha para não ocorrer demais erros na leitura. Os valores de cada absorção era disposto na tela do Espectrofotômetro e assim sendo anotadas.

Os valores que corretamente podem ser dados em cada leitura devem ser correspondidos aos cálculos dispostos acima (Cálculo de concentração final), ou seja, se no Tubo1 o valor da concentração final corresponde á 1, a leitura da absorbância deve ser próxima ou igual a este.

Dispostos a seguir os valores de absorbância resultantes da leitura no equipamento:

Tubo 1= 0,133

Tubo 2= 0,258

Tubo 3= 0,324

Tubo 4= 0,145

Tubo 5= 0,239

Analisando os resultados, concluímos