Prospecção de microrganismos

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Engenharia de Alimentos

Laboratório de Bioengenharia

Prática 1

“Prospecção de microrganismos”

São José do Rio Preto

Agosto/2015

1. INTRODUÇÃO

Em alimentos, os fungos são considerados microrganismos que não oferecem risco direto à saúde, apesar de algumas espécies de bolores serem produtoras de micotoxinas julgadas prejudiciais ao homem. Com relação às leveduras, a ocorrência de espécies patogênicas em alimentos é praticamente desconhecida, sua importância reside muito mais no fato de serem eventuais agentes de deterioração (LEITÃO,1988).

O termo “deterioração fúngica dos alimentos” geralmente está associado ao crescimento visível de colônias. No entanto, muitas vezes, um produto mostra-se alterado por bolores, independente da visualização das colônias, alteração esta devida principalmente à atividade hidrolítica apresentada por muitas espécies (BANWART, 1979).

Para o desenvolvimento de microrganismos é necessária a presença de nutrientes do tipo carboidratos, proteínas, vitaminas e sais minerais. O pH ideal está em tomo de 4,5 a 5,0, embora sobrevivam na faixa de 3,0 a 7,5. Geralmente se desenvolvem sob temperaturas 2 entre 20° e 30°C, morrem a 45° ou 47°C. As leveduras são consideradas anaeróbicas facultativas, na presença de oxigênio se desenvolvem mais rapidamente produzindo CO2 e H2O. Na ausência de oxigênio crescem mais lentamente eliminando etanol, CO2 e H2O.

Os métodos tradicionais utilizados na quantificação de microrganismos permitem contar as unidades formadoras de colônias, partindo-se do princípio de que cada célula microbiana presente em determinada amostra irá formar, quando fixada em meio sólido adequado, uma colônia visível e isolada (SILVA e JUNQUEIRA, 1995).

Os fungos por serem aeróbios, preferencialmente são inoculados na superfície do meio de cultura, podendo ser utilizado, em alguns casos, o método de plaqueamento em profundidade. Os meios de cultura, rotineiramente, utilizados em laboratório de análise de alimentos são o ágar batata dextrosado, acidificado com solução de ácido tartárico 10% para obter pH em torno de 3,5, o que inibe o crescimento de bactérias (DIFCO MANUAL, 1984) e o ágar dicloran rosa de bengala cloranfenicol, cuja presença de dicloran e rosa de bengala reduzem o diâmetro das colônias de bolores e o cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias presentes na amostra. Após a inoculação as placas devem ser incubadas durante cinco dias para permitir o desenvolvimento das colônias (KING et al., 1979).

Novo método analítico foi proposto pelo Simplate, baseado na atividade metabólica fúngica. O meio emite fluorescência quando enzimas do substrato são metabolizadas por bolores e leveduras, permitindo a contagem das colônias através da formação de fluorescência sob luz ultravioleta. O tempo de incubação é reduzido de cinco para dois dias, permitindo a obtenção do resultado em menos da metade do tempo exigido pela análise convencional (CHEN et al.,1997).

Em relação ao método DRBC (meio de cultura Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol), apesar do tempo de incubação ser de 5 dias, este permite uma melhor visualização das colônias devido à suas características, tais como: a presença de Rosa de Bengala, que restringe o crescimento excessivo das colônias de fungos com desenvolvimento rápido, permitindo assim que colônias de fungos com desenvolvimento lento também se desenvolvam; o pH reduzido inibe a dispersão dos fungos; a presença de Dicloran ajuda a reduzir o diâmetro das colônias e a presença de Cloranfenicol antibiótico inibe o crescimento de outras bactérias presentes, conforme concluiu KING et al, 1979.

Apesar da legislação brasileira (BRASIL, 2001) não exigir a quantificação de bolores e leveduras em alguns dos produtos estudados, Leitão (1988) considera como valores limítrofes destes microrganismos a contagem máxima entre 104 e 106. Além disso, estes micro-organismos foram analisados devido a possibilidade de se desenvolverem posteriormente, durante o período de armazenamento (BORGES et al., 2010).

1. OBJETIVO

A prática teve como objetivo isolar e selecionar microrganismos, visando a produção de enzimas por fermentação em estado sólido e a produção de bebidas alcoólicas.

1. MATERIAL E MÉTODOS

• Amostra de terra
• Agar-amido
• Água destilada
• Béquer
• Placas de Petri
• Bico de bulsen
• Alça de Drigalski
• Alça de transferência
• Tubos de ensaio
• Agar nutriente
• Banana (polpa e casca)
• PDA (Potato Dextrose Agar)

Para bactérias e fungos:

Primeiramente coletou-se amostras de terra de diferentes pontos do Ibilce e ressuspendeu-se em água destilada até a terra ficar submersa, homogeneizou-se bem. Acendeu-se o bico de bulsen e em uma placa de petri contendo meio agar-amido previamente colocado e já seco, inoculou-se por superfície com 0,1 mL da solução de terra e água preparada, passando a alça de drigalski. Depois, em outra placa de petri, inoculou-se também por profundidade, ou seja, acrescentou-se 1 mL da solução de terra e água, juntamente com o agar-amido. Deixou-se as placas por 24h em temperatura ambiente e depois colou-se na geladeira por uma semana. Após esse período, observou-se a formação de um halo e isolou-se um respectivo microrganismo em outra placa de petri, pegando-o com uma alça de transferência previamente flambada e estriando na placa de petri, como mostra a figura 1.