A Bioquímica Amilase

Introdução

Este experimento tem por finalidade em testar a influência da temperatura e pH na atividade da enzima amilase.

A atividade enzimática pode ser avaliada medindo-se a velocidade de consumo do substrato ou a velocidade de aparecimento do produto.

Esta atividade depende de vários fatores, tais como o tempo de reação, a concentração da enzima, a concentração do substrato, a temperatura, o pH do meio. O pH e a temperatura ideal variam de acordo com cada enzima. A velocidade das reações químicas, na atividade enzimática aumenta quando se aumenta a temperatura.

Para exemplificar estes conceitos, nesta aula prática será avaliada a atividade da amilase salivar. A α-amilase é encontrada nos animais (no sangue, saliva e suco pancreático), plantas, fungos e bactérias. Esta enzima pode ter ação no estômago por diversas horas e digerir até 40% do amido. A tal enzima é um endo-amilase e hidrolisa as ligações glicosídicas do amido, glicogênio. Ela hidrolisa ligações alfa-1,4-glicosídicas de moléculas de amido, liberando primariamente oligossacarídeos de glicose e posteriormente açúcares redutores. Como resultado da ação não ordenada da amilase salivar, obtém-se rapidamente uma mistura complexa de produtos de hidrólise que incluem: amido solúvel, maltodextrinas, maltoses, e glicose. Na boca, a amilase salivar tem participação na digestão de carboidratos.

        O amido é composto pela amilose e amilopectina. A amilose forma micelas hidratadas que adsorvem iodo, presente na solução de lugol, em suas espirais helicoidais, apresentando coloração azul-violeta.

Resultados

O pH e a temperatura, podem ser alguns dos agentes causadores da desnaturação de enzimas, a amilase salivar tem papel fundamental na quebra das ligações glicosídicas transformando amido em glicose, que é essencial no fornecimento de energia ao metabolismo.

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Avaliação do efeito do pH na atividade enzimática

Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3
2 ml de Amido	2 ml de Amido	2 ml de Amido
2 ml de tampão fosfato	2 ml de HCl	2 ml de NaOH
0,5 ml de Saliva	0,5 ml de Saliva	0,5 ml de Saliva
20 Min a 37°C
2 Gotas de Lugol	2 Gotas de Lugol	2 Gotas de Lugol
Reação
Azul escuro (arroxeado)	Roxo escuro	Não houve Atividade

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[pic 5]

Em cada tubo foi colocada 0,5 ml de uma solução de saliva contendo em uma proporção 1:3 de saliva e tampão fosfato respectivamente, além de 2 ml de amido, compostos que atuam no pH da solução e Lugol que é o agente identificador de amido. Todos os 3 tubos foram expostos a uma temperatura constante de 37°C por 20 min.

Como pode-se notar a enzima alfa-amilase salivar que é nosso catalizador da reação atua diferente em cada faixa de pH, onde com o tampão fosfato que tem uma faixa de pH próxima a 6,8, obtivemos uma solução castanho, jána solução de HCl 0,1% com pH mais ácidoobtivemos uma coloração azul arroxeada, e na solução de NaOH 0,1% com pH bem mais básicoobtivemos uma coloração azul clara.

Avaliação da temperatura na atividade enzimática

TUBO 1	TUBO 2
2 ml de amido	2 ml de amido
2 ml de tampão fosfato	2 ml de tampão fosfato
0,5 ml de saliva	0,5 ml de saliva
20 min a 37°C	20 min em agua fervente
2 gotas de lugol
Reação	Reação
Azul escuro	Roxo escuro

        

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[pic 8][pic 9]

O aumento da temperatura, aumenta a velocidade da reação. Entretanto como cada enzima tem sua temperatura ótima e a máxima de atuação, e que valores muito superiores e muito inferiores a essa temperatura podemos ter a desnaturação desta enzima.

• No tubo 1 O castanho indica total quebra das ligações glicosídicas, transformando amido em glicose.
• No tubo 2 nota-se uma cor azulada, indicando assim a presença de amido em solução.

Discussões

Efeitos do pH: A enzima α- amilase salivar em pH 6,8, catalisa a hidrolise das ligações α – 1-4 da cadeia glicosídica do amido.

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