A SEPARAÇÃO DOS PIGMENTOS EXTRAÍDOS DA FOLHA DE BETERRABA POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA PREPARATIVA

Universidade Federal do Paraná

Prática 4 - SEPARAÇÃO DOS PIGMENTOS EXTRAÍDOS DA FOLHA DE BETERRABA POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA PREPARATIVA

Yasmin Betezek Schlichta

Curitiba, 31 de agosto de 2017

INTRODUÇÃO

Como foi visto anteriormente, a cromatografia de camada delgada é uma técnica de separação por diferença de migração do analito dependente do solvente e da polaridade.

A folha da beterraba contém substâncias que podem ser detectadas pelo pigmento como a clorofila, cuja cor é verde. Além da clorofila, podemos observar o amarelo proveniente das xantofilas e betacaroteno, e o roxo da betacianina. Tais substâncias podem ser separadas e extraídas por diferença de polaridade.

As xantofilas são carotenoides hidrofóbicos, ou seja, compostos apolares. O betacaroteno também é da família dos carotenoides e, portanto, é apolar. A clorofila é composta por um anel porfirínico e uma cauda apolar.

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Figura 1 – Estruturas das moléculas de clorofila A e clorofila B

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Figura 2 – Estrutura da molécula de betacaroteno

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Figura 3 – Estrutura da molécula de luteína, exemplo de uma xantofila

PROCEDIMENTO

        O extrato utilizado nesta prática foi previamente preparado e armazenado de forma a não adsorver umidade. Como o béquer que continha os analitos foi armazenado em solvente orgânico, e este por sua vez evaporou, foi adicionado diclorometano suficiente para retirar os pigmentos aderidos no béquer e concentrar num volume mínimo para aplicar na placa.

        Uma única placa cromatográfica de tamanho 20 x 5 cm foi preparada para essa extração. Em vez de aplicar em um ponto, foram feitos vários pontos lado a lado formando uma linha uniforme na placa. A extração foi realizada numa cuba saturada grande e a fase móvel utilizada foi hexano e acetato de etila na proporção 2:1.

        Após a extração e secagem da placa, foram obtidas várias faixas de pigmento. Cada bancada foi responsável por uma faixa específica para proceder com a etapa seguinte. Essa faixa de pigmento foi raspada e transferida para um béquer com diclorometano para extrair o analito da sílica e submetido à filtração em algodão. O filtrado foi aquecido até ser concentrado em um volume suficiente para fazer um ponto de aplicação na placa.

        A extração foi realizada em uma placa cromatográfica de tamanho 5 x 5 cm, em uma cuba saturada com fase móvel composta por hexano e acetato de etila na proporção 1:1.

        As medidas de distância e tempo foram anotadas para o cálculo de Rf e identificação do composto.

RESULTADOS

        A primeira extração que foi na placa de 20 x 5 cm em hexano e acetato de etila 2:1 teve uma duração de 36,06 minutos, e a frente de solvente estava a uma distância de 12,8 cm da linha de aplicação.

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Figura 4 – extração dos pigmentos na placa de 20 x 5 cm, em hexano e acetato de etila 2:1

O pigmento selecionado para a etapa seguinte foi o primeiro verde localizado na faixa de 0,9 a 1,5 cm de distância da linha de aplicação.

A segunda extração feita na placa de 5 x 5 cm em hexano e acetato de etila 1:1 forneceu como resultado uma mancha mesclada de verde e amarelo suave, quase indetectável situada a 2,0 cm do ponto de aplicação. A frente de solvente estava a uma distância de 5,0 cm do ponto de aplicação e teve uma duração de 6,26 minutos.

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Figura 5 – extração do pigmento selecionado na placa de 5 x 5 cm, em hexano e acetato de etila 1:1

Tabela 1 – Resultados obtidos na extração com fase móvel na proporção 2:1

Cor da banda	Pigmento	da (cm)	ds (cm)	Rf
Verde	Clorofila	0,9 – 1,5	12,8	0,070

Tabela 2 – Resultados obtidos na extração com fase móvel na proporção 1:1

Cor da banda	Pigmento	Da	Ds	Rf
Verde	Clorofila	2,0	5,0	0,40

CONCLUSÃO

        Foi difícil concluir se a mancha na segunda extração era de fato o mesmo composto do ponto padrão devido à baixa concentração, visto que a mancha foi quase indetectável. Os valores de Rf ficaram diferentes e tem sinais de contaminação de outro pigmento na placa menor. Podemos citar alguns motivos, durante todo o processo, para tal resultado: